1樓:清溪看世界
一、原理不同
bca蛋白定量:鹼性條件下,蛋白將cu2+還原為cu+, cu+與bca試劑形成紫顏色的絡合物,吸光強度與蛋白濃度成正比。測定其在562nm處的吸收值,並與標準曲線對比,即可計算待測蛋白的濃度。
bradford法蛋白定量:在一定的濃度範圍內,蛋白質-染料複合物在波長為595nm處的光吸收與蛋白質含量成正比,通過測定595nm處光吸收的增加量可知與其結合蛋白質的量。
二、樣品中物質含量不同
bca蛋白定量:樣品中高達5%的sds,5%的triton x-100,5%的tween 20、60、80。
bradford法蛋白定量:樣品中sds低於0.01%,triton x-100低於0.05%,tween 20、60、80低於0.015%。
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bca蛋白定量的注意事項:
1、bca蛋白定量時,吸光度可隨時間的延長不斷加深,且顯色反應會隨溫度公升高而加快,故如果濃度較低,適合較高溫度孵育or延長孵育時間。
2、標準蛋白液的加量應當準確,如果加量不準確,會導致製作出來的標準曲線出現偏差,影響待測樣品的濃度計算,所以一方面需要用梯度稀釋的方法來配置標準蛋白液,另一方面應使用精確度高的移液槍。
3、為加快bca蛋白定量測定蛋白濃度的速度可以適當用微波爐加熱,但切勿過熱。
4、當結果出現空白組本身就有較高的背景,可用bradford法蛋白定量重新測定蛋白濃度。
2樓:北京索萊寶科技****
1、bradford法測得的主要是鹼性氨基酸和芳香族氨基酸,bca則沒有選擇性
2、bca法蛋白濃度定量是二價銅離子在鹼性的條件下,可以被蛋白質還原成一價銅離子(biuret reaction),一價銅離子和獨特的bca solution a(含有bca)相互作用產生敏感的顏色反應。兩分子的bca螯合乙個銅離子,形成紫色的反應複合物。該水溶性的複合物在562nm處顯示強烈的吸光性,吸光度和蛋白濃度在廣泛範圍內有良好的線性關係,因此根據吸光值可以推算出蛋白濃度。
bradford法蛋白定量是染料與蛋白質結合後引起染料最大吸收的改變,從465nm變為595nm,光吸收增加。蛋白質染料複合物具有高的消光係數,因此大大提高了蛋白質測定的靈敏度,最低檢出量為1μg蛋白。染料與蛋白質的結合是很迅速的過程,大約需2min,結合物的顏色在1h內是穩定的。
一些陽離子,如k+,na+,mg2+,(nh 4 ) 2 so 4,乙醇等物質不干擾測定,而大量的去汙劑如tritonx100,sds等嚴重干擾測定,少量的去汙劑可通過用適當的對照而消除。由於染色法簡單迅速,干擾物質少,靈敏度高,現已廣泛應用於蛋白質含量的測定。
尿常規與24小時尿蛋白定量的區別
溥錦 尿常規與24小時尿蛋白定量是有區別的。尿常規往往受出汗 喝水 尿液多少等因素的影響尿液產生濃縮或稀釋,檢查出來尿蛋白不是偏多就是偏少,尿常規同時也不能正確告訴我們自己一天中究竟有多少尿蛋白,對 的效果反映不明確。而24小時尿蛋白定量能把24小時內的尿液中蛋白總量檢驗出來,不受出汗 喝水 尿液多...
請教尿常規結果和尿蛋白定量結果的矛盾
弱陽的蛋白沒有診斷意義 蛋白定量也很好 沒必要看醫生的 沒有任何腎臟問題 偶爾一次陽性可能是喝水少,尿液濃縮,或者勞累造成的,也可能是實驗室誤差 病情分析 您好,根據您提供的檢查結果,不能診斷腎臟疾病,一方面可以能是因為檢查誤差,一方面可能是小便不是中段尿或者尿杯有汙染影響了檢查結果。但是總的來說您...
24小時尿蛋白定量1882MG,24小時尿蛋白定量200mg正常嗎
1,你好,從你的描述看,主要異常是尿檢隱血和蛋白尿陽性,諮詢相關的問題,這種情況需要積極的進行明確下原因,屬於蛋白尿原因待查,引起重視。出現的蛋白尿一定要重視,需要明確下原因,最常見的是各種腎炎以及免疫性病變,以及生理性蛋白尿等。2需要進行一系列的檢查,明確下蛋白尿性質,同時進行24小時尿蛋白定量,...