1樓:0窮人家的孩子
一種抗體可以刺激機體產生多種效應b細胞。因此需要第二步篩選。但是一種雜交瘤細胞可以產生多種抗體,所以必須進行第二次篩選,篩選出能產生目的抗體的單克隆抗體。
單克隆抗體的分泌不能證明生物膜在結構和功能上是一個統一的整體。因為單抗合成的蛋白質過程不同於一般細胞利用細胞器正常的分泌。
第一次篩選的原理與方法:細胞融合後,雜交瘤細胞的選擇性培養是第一次篩選的關鍵。普遍採用的hat選擇性培養液是在普通的動物細胞培養液中加入次黃嘌呤(h)、氨基喋呤(a)和胸腺嘧啶核苷酸(t)。
其依據是細胞中的dna合成有兩條途徑:一條途徑是生物合成途徑(“d途徑”),即由氨基酸及其他小分子化合物合成核苷酸,為dna分子的合成提供原料。在此合成過程中,葉酸作為重要的輔酶參與這一過程,而hat培養液中氨基喋呤是一種葉酸的拮抗物,可以阻斷dna合成的“d途徑”。
另一條途徑是應急途徑或補救途徑(“s途徑”),它是利用次黃嘌呤—鳥嘌呤磷酸核苷轉移酶(hgprt)和胸腺嘧啶核苷激酶(tk)催化次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷生成相應的核苷酸,兩種酶缺一不可。因此,在hat培養液中,未融合的效應b細胞和兩個效應b細胞融合的“d途徑”被氨基喋呤阻斷,雖“s途徑”正常,但因缺乏在體外培養液中增殖的能力,一般10d左右會死亡。對於骨髓瘤細胞以及自身融合細胞而言,由於通常採用的骨髓瘤細胞是次黃嘌呤—鳥嘌呤磷酸核苷轉移酶缺陷型(hgprt)細胞,因此自身沒有“s途徑”,且“d途徑”又被氨基喋呤阻斷,所以在hat培養液中也不能增殖而很快死亡。
惟有骨髓瘤細胞與效應b細胞相互融合形成的雜交瘤細胞,既具有效應b細胞的“s途徑”,又具有骨髓瘤細胞在體外培養液中長期增殖的特性,因此能在hat培養液中選擇性存活下來,並不斷增殖。
第二次篩選的原理和方法:在實際免疫過程中,由於採用連續注射抗原的方法,且一種抗原決定簇刺激機體形成相對應的一種效應b淋巴細胞,因此,從小鼠脾臟中取出的效應b淋巴細胞的特異性是不同的,經hat培養液篩選的雜交瘤細胞特異性也存在差異,所以必須從雜交瘤細胞群中篩選出能產生針對某一預定抗原快定簇的特異性雜交瘤細胞。通常採用有限稀釋克隆細胞的方法,將雜交瘤細胞多倍稀釋,接種在多孔的細胞培養板上,使每一孔含一個或幾個雜交瘤細胞(理論上30%的孔中細胞數為0時,才能保證有些孔中是單個細胞),再由這些單細胞克隆生長,最終選出分泌預定特異抗體的雜交細胞株進行擴大培養。
2樓:
能分泌單抗的一定是雜交瘤細胞,
1種,第一行的話倒過來是不成立的,因為雜交瘤細胞不一定能表達出單抗,所以要篩選,
3樓:sweet草莓丶布丁
核膜、內質網、高爾基體、核膜等的膜性質基本相同,可以相互通過形成小泡和融合的方式相互轉化,分泌抗體時內質網、高爾基體、核膜相互通過形成小泡和融合的方式相互轉化能證明生物膜在結構和功能上是一個統一的整體
4樓:**不能當飯吃
一樓回答的好!好專業。
生物單克隆抗體的問題
5樓:匿名使用者
1、免疫處理後獲得的效應b細胞是多種,因為機體時刻都或多或少的受到外界物質的入侵,因此提取的效應b細胞除了所需的還有其他的
2、第一次篩選獲得的雜交瘤細胞不止一種。原因同上,因為參與融合的效應b細胞不是一種。從另一個角度想,如果第一次就可以篩選單一性質的雜交瘤細胞,那何必要進行第二次篩選呢?
3、依據兩種生物學原理:細胞融合和細胞培養。
生物學原理這個我還很難給你下一個定義,我的理解是好比一篇文章的中心。建議多看課本上每個實驗原理的寫法。
6樓:匿名使用者
1 多種 應該有3種吧
2 是一種
3 我也不記得這個了
7樓:猛虎少爺
1.多種 2.單種 因為是由單個b細胞與骨髓瘤細胞融合經無限增殖產生.
而每個b細胞只產生特定的一種抗體 3.細胞膜的流動性和細胞增殖.生物原理應該指通過實驗、觀察等方式並長期總結經驗所得到的理論知識.
如圖為製備單克隆抗體過程示意圖,相關敘述錯誤的是( )a.④中的篩選是為了獲得能產生多種抗體的雜
8樓:長魚菀柳
a、單克隆抗體製備過程中,第二次篩選的目的是獲得能產生特定抗體的雜交瘤細胞,a錯誤;
b、由於骨髓瘤細胞能無限增殖,因此需要在培養基中加入抑制骨髓瘤細胞dna複製的物質,以選擇出骨髓瘤細胞和b細胞融合的雜交細胞,b正確;
c、圖中有一處錯誤,即沒有先給小鼠進行免疫,c正確;
d、雜交瘤細胞的特點是既能無限增殖又能產生特定抗體,d正確.故選:a.
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