1樓:戰爭與婚姻
龍膽紫或醋酸洋紅
還有鹼性染料或改良苯酚品紅溶液
dna染色實驗
1、原理與解析
(1)真核細胞的dna主要分布在細胞核內,rna主要分布在細胞質中。
(2)甲基綠和吡羅紅兩種染色劑對dna和rna的親和力不同,甲基綠對dna親和力強,使dna顯現出綠色,而吡羅紅對rna的親和力強,使rna呈現出紅色。用甲基綠、吡羅紅的混合染色劑將細胞染色,可同時顯示dna和rna在細胞中的分布。(同時甲基綠用二苯胺或龍膽紫代替做平行)
(3)鹽酸的作用
① 鹽酸能改變細胞膜的通透性,加速染色劑的跨膜運輸;
② 鹽酸使染色體中的dna與蛋白質分離,便於dna與染色劑的結合。
注意事項
1.材料的選擇
① 選用的實驗材料既要容易獲得,又要便於觀察;
② 常用的觀察材料由人的口腔上皮細胞、洋蔥鱗片葉表皮細胞(為避免原有顏色的干擾,不可使用紫色表皮細胞)
2.取材要點
① 取口腔上皮細胞之前,應先漱口,以避免裝片中出現太多的雜質;
② 取洋蔥表皮細胞時,盡量避免材料上帶有葉肉組織細胞。
3.沖洗載玻片時水的流速要盡量慢,切忌直接用水龍頭沖洗。
4.安全要點
① 用酒精燈烘烤載玻片時,不要只集中於材料處,而應將載玻片在火焰上來回移動,使載玻片均勻受熱,以免破裂;
② 烘烤後的載玻片不要馬上放入盛有稀鹽酸的燒杯中,最好先自然冷卻1分鐘。
5.換用高倍鏡觀察材料時,只能用細準焦螺旋進行調焦,切不可動粗準焦螺旋。
主要步驟(以觀察口腔上皮細胞為例)
1.取材
① 滴: 在潔淨的載玻片上滴一滴質量分數為0.9%的nacl溶液;
② 刮: 用消毒牙籤在口腔內側壁上輕輕地刮幾下;
③ 塗: 將牙籤上的碎屑塗抹在載玻片的生理鹽水中;
④ 烘: 將塗有口腔上皮細胞的載玻片在酒精燈的火焰上烘乾。
2.水解
① 解: 將烘乾的載玻片放入裝有30ml質量分數為8%的鹽酸的小燒杯中,進行材料的水解;
② 保: 將小燒杯放入裝有30℃溫水的大燒杯中保溫5分鐘。
3.沖洗塗片
① 衝: 用緩緩的蒸餾水沖洗載玻片10秒鐘;
② 吸: 用吸水紙吸去載玻片上的水分。
4.染色
① 染:用2滴吡羅紅甲基綠混合染色劑滴在載玻片上,染色5分鐘;
② 吸: 吸去多餘染色劑;
③ 蓋: 蓋上蓋玻片。
5.觀察
① 低: 在低倍物鏡下,尋找染色均勻,色澤淺的區域,移至視野**,將物像調節清晰;
② 高: 轉到高倍物鏡,調節細準焦螺旋,觀察細胞核和細胞質的染色情況。
2%甲基綠水溶液的配製
甲基綠(methyl green) 蒸餾水加至 50mlc 用三氯甲烷抽提, 甲基綠水溶液的抽提:甲基綠為綠色粉末,屬三苯甲烷染料,這種染料是由氯代甲烷作用於結果晶紫而形成的一 種化合物。由於甲基化作用,甲基綠就比甲基綠後,所引進的甲基連線得並不牢固,容易從甲基綠中脫失。
另一方面, 在甲基化過程中,還有一部分結晶紫並沒有生成甲基綠,因此,也有人認為甲中,常有少量的甲基紫或結晶紫成份。但是,也有人認為甲基紫乃是甲基綠的衰敗產物,甲基綠在儲存過程中,會不斷產生甲基紫。因此,在配製試劑時,必須 先將甲基綠所含的甲基紫或結晶紫抽提出來,才能使細胞核內的脫氧核糖核酸染成綠色。
抽提方法是取 2%甲基綠水溶 液 20ml 傾入潔淨分液漏斗,加入三氯甲烷 20ml 充分搖盪混合,使其內的甲基紫溶於三氯甲烷中而呈紫紅色。旋動分液 漏斗下部的砂塞,慢慢把如此反覆更換三氯甲烷,直到三氯甲烷無紫紅色為止,即可得到得純的甲基綠溶液。
英文名稱:methyl green 分子式:c27h35cl4n3zn 分子量:
608.78 iupac 名稱: 4-((4-(dimethylamino)phenyl)(4-(dimethyliminio)cyclohexa-2,5-dieny lidene)methyl)-n-ethyl-n,n-dimethylbenzenaminium dichloride compound with zinc(ii) chloride 甲基綠是具有金屬光澤的綠色微結晶或亮綠色粉末。
溶於水,顯藍綠色。 稍溶於乙醇,不溶於戊醇。 鹽酸中顯紅黃色,在氫氧化鈉中無色。
試劑溶液在可見光區有吸收峰 (λmax=633.8nm)。 與 reo4-、hgcl42-、bii4-、aucl4-和 gacl4-等形成離子締合物。
用於光度法測定 hg2+、reo4-等,定性檢出鐵氰化物,酸鹼指示劑和細 胞染色劑。
甲基綠為鹼性染料,它易與聚合程度高的 dna 結合呈現綠色。 又稱雙綠 sf 雙綠 sf。綠色晶體,具金黃色光澤,或淡綠色粉末。
溶於水,呈藍 綠色。微溶於乙醇,不溶於乙醚。 由氯甲烷與甲基紫(c.
i.鹼性紫 1)反應制得。 商品通常為鋅復鹽 c26h33n3cl2zncl2(稱 c.
i.鹼性藍 20)。 用於細菌染色(新鮮標本細胞核染色)甲基綠-鹽酸混合物用於檢定精子、 淋球菌和肥大細胞染色。
甲基綠可用於鑑定 dna。dna 遇甲基綠(常溫)會被染成藍綠色。 甲基綠—派洛寧 (methyl green-pyronin)為鹼性染料,它分別能與細胞內的 dna、rna 結合呈現不同顏色。
當甲基綠與派洛寧作為混合染料時,甲基綠與染色質中 dna 選擇性結合顯示綠色或藍色;派洛寧與核仁、細胞質中的 rna 選擇性結 合顯示紅色。其原因可能是兩種染料的混合染液中有競爭作用,同時兩種核 酸分子都是多聚體,而其聚合程度有所不同。
甲基綠易與聚合程度高的 dna 結合呈現綠色。而派洛寧則與聚合程度較低的 rna 結合呈現紅色(但解聚的 dna 也能和派洛寧結合呈現紅色)。即 rna 對派洛寧親和力大,被染成紅色, 而 dna 對甲基綠親和力大,被染成綠色。
使用配製方法 關於吡羅紅和甲基綠分裝粉的使用方法 試劑及配製方法( 1) 試劑 ) 質量分數為 0.9%的 nacl 溶液,質量分數為 8%的鹽酸,乙酸鈉,乙酸, 蒸餾水,吡羅紅甲基綠混裝粉。如果化學試劑商店沒有吡羅紅甲基綠混裝粉, 可以分別購買甲基綠和吡羅紅 g,然後按 a 液的第二種方法配製(見下文)。
( 2) 染色劑的配製 ) ①染色劑 a 液的兩種配製方法 第一種方法:取吡羅紅甲基綠粉 1 g,加入到 100 ml 蒸餾水中溶解,然 後用濾紙過濾,將濾液放入棕色瓶中備用。 第二種方法:
取甲基綠 2 g 溶於 98 ml 蒸餾水中,取吡羅紅 g 5 g 溶於 95 ml 蒸餾水中。取 6 ml 甲基綠溶液和 2 ml 吡羅紅溶液加入到 16 ml 蒸餾 水中,即為 a 液,放入棕色瓶中備用。(注意:
用於核酸染色的是吡羅紅 g, 請不要錯買吡羅紅 b。) ②染色劑 b 液的配製方法 b 液是一種緩衝液, 由乙酸鈉和乙酸混合而成。 先取乙酸鈉 16.
4 g,用蒸餾水溶解至 1 000 ml 備用;再取乙酸 12 ml,用蒸 餾水稀釋至 1 000 ml 備用。取配好的乙酸鈉溶液 30 ml 和稀釋的乙酸 20 ml, 加蒸餾水 50 ml,配成 ph 為 4.8 的 b 液(緩衝液)。
③染色劑的配製 染色劑是由 a 液、b 液混合配製而成的。取 a 液 20 ml 和 b 液 80 ml 混合,就是實驗中所用的吡羅紅甲基綠染色劑。應該注意的是 該試劑應現配現用
2樓:匿名使用者
甲基綠 綠色
龍膽紫 紫色
醋酸洋紅 紅色
這三樣是染細胞中的染色體
如果是做dna的粗提取與鑑定這個實驗(在選修1課本上),提取出來的dna用二苯胺染成藍色
3樓:海的那邊有寶藏
二苯胺,熱水浴顯藍色,生物學檢測dna常用方法 ,還有甲基綠,染色後呈綠色,觀察dna常用方法, 龍膽紫、醋酸洋紅不行,他們是染染色體的,生物上不讓這麼答。
4樓:傳說小液
龍膽紫和醋酸洋紅是對染色質(體)進行染色,前者染成紫色,後者染成紅色。
甲基綠和二苯胺是對dna染色,前者染成綠色,後者染成藍色
5樓:匿名使用者
鹼性染料。。。如:龍膽紫、醋酸洋紅
6樓:墨小鵰
甲基綠 染成綠色 還有龍膽紫和醋酸洋紅 分別是紫色和紅色
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