1樓：劉夢真唯一
原理：利用pcr高度的特異性，通過特定的引物能在複雜樣品中得到的特定序列的dna，而這種特定dna的產量跟反應初始階段模板量是直接相關的。簡單說來。
經過一個pcr迴圈，可以把一個模板變成兩個，在經過一個迴圈，就會變成四個，以此類推。如果pcr的檢測線是1000個產物，那麼當你的初始樣品中模板是n個，那就需要經歷的迴圈數為 的時候才能檢測，這就把迴圈數與初始樣品中模板數聯絡起來了。也就是說經過計算，達到檢測限的迴圈數就能反映初始rna樣品中某種rna的含量多少。
在實際中，使用了特殊的含有熒光劑的引物，光學檢測相應光強度的產物所需的迴圈數，能高度靈敏的達到目的。 realtime-pcr有兩種。絕對定量和相對定量。
絕對定量常用於逆轉錄病毒侵染細胞的檢測。
用途：通過逆轉錄，以及taq酶利用hiv的特異引物進行擴增，最終的迴圈數可以反應你的這群t細胞正在被多少個hiv侵染。 相對定量常用於檢測實時的轉錄譜。
1.逆轉錄pcr（reverse transcription pcr）或者稱反轉錄pcr（reverse transcription-pcr, rt-pcr），是聚合酶鏈式反應（pcr）的一種廣泛應用的變形。在rt-pcr中，一條rna鏈被逆轉錄成為互補dna，再以此為模板通過pcr進行dna擴增。
2.雙鏈dna的變性溫度是由雙鏈中c+g的含量決定的，c+g含量越高，模板dna的溶解溫度就越高。在選擇的變性溫度下，模板鏈越長變性所需時間就越長。
如果變性溫度過低或變性時間過短，會使僅僅富含a+t區域變性。當模板dna的g+c含量超過55%的時需要更高的變性溫度。
3.復性過程採用的溫度至關重要如果復性溫度太高，寡核苷酸引物不能與模板很好的復性，擴增效率將會降低。如果復性溫度太低，引物將產生非特異性復性，從而導致非特異性的dn**段的擴增。
復性通常在比理論計算的引物和模板的溶解溫度低3—5℃的條件下進行。
4.pcr擴增所需的迴圈數目決定於反應體系中起始的模板拷貝數以及引物延伸和擴增的效率。一旦pcr反應進入幾何級數的增長期，反應會一直持續下去，直至某一成分成為限制因素。
從這一點上來說，擴增產物中絕大多數應該是特異性的擴增產物，而非特異性的擴增產物應該低到難以檢測到的程度。用taqdna聚合酶（效率為0.7）在一個含有10的5次方個拷貝的靶序列的反應體系中進行30個迴圈後往往可以做到上述的理想情況。
2樓：古弘文欒琦
rt-pcr有兩種解釋：
1，最常用的理解：rt
是‘逆轉錄’（reverse
transcription）的縮寫
2，現在也有人這麼用：rt是‘實時’（real
time）的縮寫
1，先說逆轉錄pcr：
這項技術使用的‘逆轉錄酶’來自逆轉錄病毒，是一種能按照鹼基互補配對原則，以脫氧核糖核苷酸為底物，以寡居dt為引物，把mrna轉換成相應dna的酶，由於該酶的效果與中心法則（dna所承載的生物資訊表達順序應該是dna-rna-蛋白）順序相反，故而有'逆轉錄'之稱。
由於逆轉錄反應使用了引物和模板，也是聚合酶鏈式擴增的（pcr是‘鏈式擴增反應’polymerase
chain
reaction
的縮寫）故稱為rt-pcr。
再說其用途：
我們提取的rna主要是rrna，即核糖體rna，但很少有人用它做些什麼，倒是含量較少的mrna，即信使rna是中心法則所述的遺傳資訊表現的中轉站，所以我們要把微量的信使rna搞出來，更重要的是，rna太容易分解了，環境中無處不在的rna酶啊，以及其容易被水解的特點啊，讓你不得不盡快把珍貴的信使rna轉化成穩定的形式，於是就有了rt-pcr。
2，再說實時pcr
細胞瞬時轉錄的mrna種類頗多，各種mrna含量也有實時的改變，這反映了細胞核內轉錄因子根據環境要求在做出相應的變化，realtime-pcr，以及quantitative
realtime-pcr
（簡稱qrt-pcr）就應運而生。
原理：利用pcr高度的特異性，通過特定的引物能在複雜樣品中得到的特定序列的dna，而這種特定dna的產量跟反應初始階段模板量是直接相關的。簡單說來。
經過一個pcr迴圈，可以把一個模板變成兩個，在經過一個迴圈，就會變成四個，以此類推。如果pcr的檢測線是1000個產物，那麼當你的初始樣品中模板是n個，那就需要經歷的迴圈數為
的時候才能檢測，這就把迴圈數與初始樣品中模板數聯絡起來了。也就是說經過計算，達到檢測限的迴圈數就能反映初始rna樣品中某種rna的含量多少。
在實際中，使用了特殊的含有熒光劑的引物，光學檢測相應光強度的產物所需的迴圈數，能高度靈敏的達到目的。
realtime-pcr有兩種。絕對定量和相對定量。
絕對定量常用於逆轉錄病毒侵染細胞的檢測，比如你想知道有多少hiv侵染了樣本中的t細胞，你可以收集一定數量的t細胞並提取rna，通過逆轉錄，以及taq酶利用hiv的特異引物進行擴增，最終的迴圈數可以反應你的這群t細胞正在被多少個hiv侵染。
相對定量常用於檢測實時的轉錄譜，例如在給藥前後，某重要基因轉錄的實時變化，可以分別收取給藥前後的全rna，用相對轉錄量不變的基因為內參，如gapdh或beta-actin，與目標基因轉錄的轉錄量對比，來定量反應藥物對目的基因轉錄含量的影響。一氣呵成，難免有錯，看著玩吧
rt-pcr的原理是什麼？有何用途？
3樓：禁封
rt-pcr有兩種解釋：
1，最常用的理解：rt 是‘逆轉錄’（reverse transcription）的縮寫
2，現在也有人這麼用：rt是‘實時’（real time）的縮寫
1，先說逆轉錄pcr：
這項技術使用的‘逆轉錄酶’來自逆轉錄病毒，是一種能按照鹼基互補配對原則，以脫氧核糖核苷酸為底物，以寡居dt為引物，把mrna轉換成相應dna的酶，由於該酶的效果與中心法則（dna所承載的生物資訊表達順序應該是dna-rna-蛋白）順序相反，故而有'逆轉錄'之稱。
由於逆轉錄反應使用了引物和模板，也是聚合酶鏈式擴增的（pcr是‘鏈式擴增反應’polymerase chain reaction 的縮寫）故稱為rt-pcr。
再說其用途：
我們提取的rna主要是rrna，即核糖體rna，但很少有人用它做些什麼，倒是含量較少的mrna，即信使rna是中心法則所述的遺傳資訊表現的中轉站，所以我們要把微量的信使rna搞出來，更重要的是，rna太容易分解了，環境中無處不在的rna酶啊，以及其容易被水解的特點啊，讓你不得不盡快把珍貴的信使rna轉化成穩定的形式，於是就有了rt-pcr。
2， 再說實時pcr
細胞瞬時轉錄的mrna種類頗多，各種mrna含量也有實時的改變，這反映了細胞核內轉錄因子根據環境要求在做出相應的變化，realtime-pcr，以及quantitative realtime-pcr （簡稱qrt-pcr）就應運而生。
原理：利用pcr高度的特異性，通過特定的引物能在複雜樣品中得到的特定序列的dna，而這種特定dna的產量跟反應初始階段模板量是直接相關的。簡單說來。
經過一個pcr迴圈，可以把一個模板變成兩個，在經過一個迴圈，就會變成四個，以此類推。如果pcr的檢測線是1000個產物，那麼當你的初始樣品中模板是n個，那就需要經歷的迴圈數為
的時候才能檢測，這就把迴圈數與初始樣品中模板數聯絡起來了。也就是說經過計算，達到檢測限的迴圈數就能反映初始rna樣品中某種rna的含量多少。
在實際中，使用了特殊的含有熒光劑的引物，光學檢測相應光強度的產物所需的迴圈數，能高度靈敏的達到目的。
realtime-pcr有兩種。絕對定量和相對定量。
絕對定量常用於逆轉錄病毒侵染細胞的檢測，比如你想知道有多少hiv侵染了樣本中的t細胞，你可以收集一定數量的t細胞並提取rna，通過逆轉錄，以及taq酶利用hiv的特異引物進行擴增，最終的迴圈數可以反應你的這群t細胞正在被多少個hiv侵染。
相對定量常用於檢測實時的轉錄譜，例如在給藥前後，某重要基因轉錄的實時變化，可以分別收取給藥前後的全rna，用相對轉錄量不變的基因為內參，如gapdh或beta-actin，與目標基因轉錄的轉錄量對比，來定量反應藥物對目的基因轉錄含量的影響。一氣呵成，難免有錯，看著玩吧
4樓：匿名使用者
rt—pcr（reverse transcription-polymerase chain reaction）是將rna的反轉錄（rt）和cdna的聚合酶鏈式擴增（pcr）相結合的技術。首先經反轉錄酶的作用，從rna合成cdna，再以cdna為模板，在dna聚合酶作用下擴增合成目的片段。rt—pcr技術靈敏而且用途廣泛，可用於檢測細胞中基因表達水平、細胞中rna病毒的含量和直接克隆特定基因的cdna序列。
作為模板的rna可以是總rna、mrna或體外轉錄的rna產物。無論使用何種rna，關鍵是確保rna中無rna酶和基因組dna的汙染。biog rna保護劑可有效阻止rnase活性來保護rna不被降解；儲存在rna保護劑中的rna樣本在-20℃條件可儲存六個月，並且加入保護劑的rna可直接做下游實驗，無任何影響。
biog super cdna synthesis kit具有超高的靈敏度，最低可檢測到1pg總rna 中的幾十個目標rna分子，反應結果適用於後續的pcr分析、pcr克隆、定量pcr等。
5樓：匿名使用者
pcr全稱多聚酶鏈式反應，原理是dna的體外擴增。
具體來說：在ep管里加入dna、合成原料（dntp、引物）、耐熱的dna聚合酶（taq）後，放入pcr儀，pcr儀會利用升溫使dna變性，在聚合酶的作用下使單鏈複製成雙鏈，進而達到基因複製的目的。
用途：1、核酸的基礎研究：基因組克隆
2、不對稱pcr製備單鏈dna用於dna測序3、反向pcr測定未知dna區域
4、反轉錄pcr（rt-pcr）用於檢測細胞中基因表達水平、rna病毒量以及直接克隆特定基因的cdna
5、熒光定量pcr用於對pcr產物實時監控6、cdna末端快速擴增技術
7、檢測基因的表達
8、醫學應用：檢測細菌、病毒類疾病；診斷遺傳疾病；診斷腫瘤；應用於法醫物證學
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