1樓:du知道君
一般瘦的人都是核和吸收功能不太好,也就是腸胃咯。指標要先治本麼!建議你先要調養一下胃,最好去中醫那裡看看是胃虛還是其他什麼改伏盯的!一味的廳歲吃反而會加重胃的負擔。
質粒轉染293t細胞進行luciferase檢測,細胞密度要達到多少
2樓:
luciferase報告基因系統是以螢光素(luciferin)為底物來檢測螢火蟲螢光素酶(fireflyluciferase)活性的一種報告系統。螢光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin,在luciferin氧化的過程中,會發出生物螢光(bioluminescence)。然後可以通過螢光測定儀也稱化學發光儀(luminometer)或液閃測定儀測定luciferin氧化過程中釋放的生物螢光。
螢光素和螢光素酶這一生物發光體系,可以極其靈敏、高效地檢測基因的表達。是檢測轉錄因子與目的基因啟動子區dna相互作用的一種檢測方法。 轉錄因子是一種具有特殊結構、行使調控基因表達功能的蛋白質分子,也稱為反式作用因子。
某些轉錄因子僅與其靶啟動子中的特異序列結合,這些特異性的序列被稱為順式作用元件,轉錄因子的dna結合域和順式作用元件實現共價結合,從而對基因的表達起抑制或增強的作用。螢光素酶報告基因實驗(luciferase assay)是檢測這類轉錄因子和其靶啟動子中的特異順序結合的重要手段。 其原理簡述如下:
1)構建乙個將靶啟動子的特定片段插入到螢光素酶表達序列前方的報告基因質粒,如pgl3-basic等。 (2) 將要檢測的轉錄因子表達質粒與報告基因質粒共轉染293細胞或其它相關的細胞系。如果此轉錄因子能夠啟用靶啟動子,則螢光素酶基因就會表達,螢光素酶的表達量與轉錄因子的作用強度成正比。
3) 加入特定的螢光素酶底物,螢光素酶與底物反應,產生螢光,通過檢測螢光的強度可以測定螢光素酶的活性,從而判斷轉錄因子是否能與此靶啟動子片段有作用。
為什麼螢光素酶報告基因活性太低
3樓:匿名使用者
1) 用生物資訊學方法分析並**啟動子區可能的轉錄因子結合位液槐凱點。
2)設計引物用pcr法從基因組鬧喚dna中轉殖所需的靶啟動子片段,將此片段插入到螢光素酶報告基因質粒(pgl3-basic)中。
3)篩選陽性轉殖,測序。擴增轉殖並提純質粒備用。
4) 擴增轉錄因子質粒,提純備用。同時準備相應的空載質粒對照,提純備用。
5) 培養293(或其它目的細胞),並接種於24孔板中,生長10-24小時(80%匯合度)。
6) 將報告基因質粒與轉錄明咐因子表達質粒共轉染細胞。
7)提取蛋白並用於螢光素酶檢測。
8) 加入底物,測定螢光素酶的活性。
9) 計算相對螢光強度,並與空載對照比較。
哪位同學可以介紹下luciferase原理
4樓:藤原子大雄
dual-luciferase®reporter assay system e1910 dual-luciferase® reporter (dlr™) assay system (dual-luciferase® 雙螢光素酶報告基因檢測系統) 為雙報告基因檢測提供有效的手段。
在dlr™ 檢測中,螢火蟲(photinus
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