1樓：匿名使用者
流式細胞計是對細胞進行自動分析和分選的裝置。它可以快速測量、存貯、顯示懸浮在液體中的分散細胞的一系列重要的生物物理、生物化學方面的特徵參量，並可以根據預選的參量範圍把指定的細胞亞群從中分選出來。多數流式細胞計是一種零解析度的儀器，它只能測量一個細胞的諸如總核酸量，總蛋白量等指標，而不能鑑別和測出某一特定部位的核酸或蛋白的多少。
也就是說，它的細節 解析度為零。流式細胞計可同時進行多引數測量，資訊主要來自特異性熒光訊號及非熒光散射訊號。測量是在測量區進行的，所謂測量區就是照射鐳射束和噴出噴孔的液流束垂直相交點。
液流**的單個細胞通過測量區時，受到鐳射照射會向立體角為2π的整個空間散射光線，散射光的波長和入射光的波長相同。散射光的強度及其空間分佈與細胞的大小、形態、質膜和細胞內部結構密切相關，因為這些生物學引數又和細胞對光線的反射、折射等光學特性有關。未遭受任何損壞的細胞對光線都具有特徵性的散射，因此可利用不同的散射光訊號對不經染色活細胞進行分析和分選。
經過固定的和染色處理的細胞由於光學性質的改變，其散射光訊號當然不同於活細胞。散射光不僅與作為散射中心的細胞的引數相關，還跟散射角、及收集散射光線的立體角等非生物因素有關。
2樓：羅葦暴海寧
流式可以檢測的樣本很多：
細胞表面的蛋白，通過熒光抗體直接標記
細胞內部的蛋白，細胞固定，通透後再用熒光抗體識別細胞內部的dna含量，細胞固定，通透後加dna染料細胞內部鈣離子濃度，直接加鈣離子濃度熒光染料染色細胞內部線粒體膜電位，比如jc-1，羅丹明染料使用微球陣列，可以同時檢測溶液中數十種可溶性蛋白的濃度
流式細胞術是不是隻能檢測細胞表面蛋白
3樓：匿名使用者
流式可以檢測的樣本很多：
細胞表面的蛋白，通過熒光抗體直接標記
細胞內部的蛋白，細胞固定，通透後再用熒光抗體識別細胞內部的dna含量，細胞固定，通透後加dna染料細胞內部鈣離子濃度，直接加鈣離子濃度熒光染料染色細胞內部線粒體膜電位，比如jc-1，羅丹明染料使用微球陣列，可以同時檢測溶液中數十種可溶性蛋白的濃度
流式細胞術是不是隻能檢測細胞表面蛋白？也就是說流式細胞術能不能檢測到細胞內某些蛋白的含量？謝謝？
4樓：匿名使用者
可以 細胞內染色技術
細胞因子胞內染色依賴於預先對細胞進行固定、破膜處理後鑑定細胞因子特異性抗體染色的熒光訊號。
流式細胞分選可以檢測細胞質中表達的蛋白嗎
5樓：匿名使用者
流式細胞計是對細胞進行自動分析和分選的裝置。它可以快速測量、存貯、顯示懸浮在液體中的分散細胞的一系列重要的生物物理、生物化學方面的特徵參量，並可以根據預選的參量範圍把指定的細胞亞群從中分選出來。多數流式細胞計是一種零解析度的儀器，它只能測量一個細胞的諸如總核酸量，總蛋白量等指標，而不能鑑別和測出某一特定部位的核酸或蛋白的多少。
也就是說，它的細節 解析度為零。流式細胞計可同時進行多引數測量，資訊主要來自特異性熒光訊號及非熒光散射訊號。測量是在測量區進行的，所謂測量區就是照射鐳射束和噴出噴孔的液流束垂直相交點。
液流**的單個細胞通過測量區時，受到鐳射照射會向立體角為2π的整個空間散射光線，散射光的波長和入射光的波長相同。散射光的強度及其空間分佈與細胞的大小、形態、質膜和細胞內部結構密切相關，因為這些生物學引數又和細胞對光線的反射、折射等光學特性有關。未遭受任何損壞的細胞對光線都具有特徵性的散射，因此可利用不同的散射光訊號對不經染色活細胞進行分析和分選。
經過固定的和染色處理的細胞由於光學性質的改變，其散射光訊號當然不同於活細胞。散射光不僅與作為散射中心的細胞的引數相關，還跟散射角、及收集散射光線的立體角等非生物因素有關。 在流式細胞術測量中，常用的是兩種散射方向的散射光測量：
①前向角（即0角）散射（fsc）；②側向散射（ssc），又稱90角散射。這時所說的角度指的是鐳射束照射方向與收集散射光訊號的光電倍增管軸向方向之間大致所成的角度。一般說來，前向角散射光的強度與細胞的大小有關，對同種細胞群體隨著細胞截面積的增大而增大；對球形活細胞經實驗表明在小立體角範圍內基本上和截面積大小成線性關係；對於形狀複雜具有取向性的細胞則可能差異很大，尤其需要注意。
側向散射光的測量主要用來獲取有關細胞內部精細結構的顆粒性質的有關資訊。側向散射光雖然也與細胞的形狀和大小有關，但它對細胞膜、胞質、核膜的折射率更為敏感，也能對細胞質內較大顆粒給出靈敏反映。 在實際使用中，儀器首先要對光散射訊號進行測量。
當光散射分析與熒光探針聯合使用時，可鑑別出樣品中被染色和未被染色細胞。光散射測量最有效的用途是從非均一的群體中鑑別出某些亞群。 熒光訊號主要包括兩部分：
①自發熒光，即不經熒光染色細胞內部的熒光分子經光照射後所發出的熒光；②特徵熒光，即由細胞經染色結合上的熒光染料受光照而發出的熒光，其熒光強度較弱，波長也與照射鐳射不同。自發熒光訊號為噪聲訊號，在多數情況下會干擾對特異熒光訊號的分辨和測量。在免疫細胞化學等測量中，對於結合水平不高的熒光抗體來說，如何提高訊雜比是個關鍵。
一般說來，細胞成分中能夠產生的自發熒光的分子（例核黃素、細胞色素等）的含量越高，自發熒光越強；培養細胞中死細胞/活細胞比例越高，自發熒光越強；細胞樣品中所含亮細胞的比例越高，自發熒光越強。 減少自發熒光干擾、提高訊雜比的主要措施是：①儘量選用較亮的熒光染料；②選用適宜的鐳射和濾片光學系統；③採用電子補償電路，將自發熒光的本底貢獻予以補償。
樣品分選原理流式細胞計的分選功能是由細胞分選器來完成的。總的過程是：由噴嘴射出的液柱被分割成一連串的小水滴，根據選定的某個引數由邏輯電路判明是否將被分選，而後由充電電路對選定細胞液滴充電，帶電液滴攜帶細胞通過靜電場而發生偏轉，落入收集器中；其它液體被當作廢液抽吸掉，某些型別的儀器也有采用捕獲管來進行分選的。
穩定的小液滴是由流動室上的壓電晶體在幾十khz的電訊號作用下發生振動而迫使液流均勻斷裂而形成的。一般液滴間距約距約數百μm。實驗經驗公式f=v/4.
5d給出形成穩定水滴的振盪訊號頻率。
流式細胞可以對蛋白絕對定量嗎？我想檢測一種細胞表面兩種膜蛋白的分
6樓：匿名使用者
流式是可以絕對定量的，但前提是必須有標準品。這個和定量pcr一樣的。都是檢測的相對熒光強度來代表靶目標的量。
所以熒光強度本身並不能定量，而需要和已知量的標準曲線作對比。但是問題是，目前的流式標準品很有限。估計你要測的蛋白應該還沒有標準化細胞商品化。
比較現實的是比較處理前後蛋白分子數量的變化，而不是絕對值，畢竟每個細胞表面的數量相差很大。比較不同細胞群的差異才是流式最有效的目的。
流式細胞術能對蛋白質進行絕對定量嗎 5
7樓：匿名使用者
這個和western的原理是一樣的，必須有標準曲線。
有商品化的已知分子數目的抗原小珠，用熒光抗體標記後，用分子數目和熒光強度做出標準曲線，再用樣本的熒光強度對比，可以得出抗原（蛋白質）的分子數目。
如果某種蛋白在細胞中低表達，用流式細胞術能不能檢測到？
8樓：匿名使用者
能檢測到，敏感度比western blot高多了，就是elisa也比western blot高啊
9樓：匿名使用者
這個問倒我了，不太清楚
什麼是流式細胞術
10樓：匿名使用者
一種在液流系統中，快速測定單個細胞或細胞器的生物學性質，並把特定的細胞或細胞器從群體中加以分類收集的技術。其特點是通過快速測定庫爾特電阻、熒光、光散射和光吸收來定量測定細胞 dna含量、細胞體積、蛋白質含量、酶活性、細胞膜受體和表面抗原等許多重要引數。根據這些引數將不同性質的細胞分開，以獲得供生物學和醫學研究用的純細胞群體。
目前最高分選速度已達到每秒鐘3萬個細胞。
流式細胞術的步驟？
流式細胞術測細胞表面抗原步驟，請教流式細胞的具體實驗步驟
1.定量細胞濃度 2.分為2組，一組為實驗組，另一組為抗體對照組3.兩組都先加入非特異性的igg，封閉可能的fc受體4.按照抗體生產廠家的推薦濃度加入抗體，對照組加入同樣熒游標記的非特異性同型抗體。5.4 孵育半小時 6.用含0.5 bsa的pbs洗2遍 7.上機後先用抗體對照組設定陰性gate。8...
流式細胞儀的價格
卩s虍衤肀灬 產品名稱 流式細胞儀 英文名稱 flow cytometer 國產 進口 進口 產地 品牌 美國貝克曼庫爾特 型號 epics altra 參考 銷售商 貝克曼庫爾特香港 流式細胞儀 效能引數 epics altra flow cytometer with hypersort cell...
流式細胞儀怎樣檢測小鼠脾臟中Th17細胞和Treg細胞數量具
mdl科研助手 我這裡有關於流式檢測脾臟中th17細胞數量的具體實驗原理和實驗步驟，希望能幫到你。網頁鏈結 淡淡的雅興 t 細胞 th17細胞 treg細胞 疾患形成 制御 野間剛helper t cell paradigm th17 and regulatory t cells involved ...