1樓：龍鳳油洺月
測序結果紊亂，你這個描述不具體啊。是測序完全失敗，重複序列後雙峰，訊號衰減，或者別的情況啊。
2樓：來自荷園星眸微嗔的豌豆
您這個問題最後解決了嗎？請問是怎麼解決的。
構建質粒時，經酶切鑑定片段已經連上了，但是拿去測序總是不准。
3樓：網友
測序一般900~1000以後就不准了，不可信，你看下峰圖就知道了，都亂的。測序只要告訴測序公司測通即可，他們會設計解決這問題的，並幫你拼接好結果發過來，太長大不了測3個麼，不用你自己在那兒搗鼓。
4樓：匿名使用者
質粒本身有沒有問題？測序時讀到質粒序列嗎？
5樓：網友
中間有進行pcr嗎？你每乙個轉殖每乙個方向測了幾個反應，你能確定那些突變時測序錯誤的還是真的有突變嗎？
自己設計的基因匯入到載體後，擴增完成，用pcr檢測和雙酶切檢測成功，但是測序後基因配對率不高，求指教
6樓：匿名使用者
pcr檢測和酶切檢測成功的話，說明你確實插入東西了，你確定你這兩種檢測用的引物和酶都沒問題嗎？測序結果你是用正向引物測序的還是用的反向引物測序的，如果是反向引物的話，測序結果需要reverse complement以後再跟原始序列進行比較。
7樓：匿名使用者
你再比下測序結果的互補序列、反向序列、反向互補序列看看，是否是忘了這麼比較了。
如果再不是的話那就說明你的這段序列不是保守序列。
你好，我想問問為什麼菌落pcr能鑑定出來，酶切也能切出來，但測序結果為什麼比對不上
8樓：廣鴻勤先本
酶切鑑定需要培養大腸桿菌，抽提質粒後才能進行。缺點是耗時，優點是結果可靠。菌落pcr只需用接種針或小槍頭蘸一下菌落或菌液，再接入pcr體系中，通過pcr即可判斷目標條帶的存在。
優點是獲得結果快，缺點是可能有假陽性。
t 載體與 目的基因連線成功，測序結果也正確。從新搖菌，提取質粒，在進行雙酶切，一直切不下來。
9樓：匿名使用者
解決辦法：bai1、cla1是乙個比較不常見的酶，du可能酶切體系和。
zhiecor1的緩衝dao體系不一樣，試著分別回酶切，就是先切cla1，然答後純化後切ecor1；或者查詢哪個酶的酶切效率高些，那個後切；2、3個小時可能太短了，我一般都是5個小時，或者過夜；3、可能是你菌挑錯了，或汙染了，重新調菌或者把原來構建成功的質粒進行轉化，再酶切。希望對你有幫助。
10樓：郭海強
可能是你酶的問題哦，加入酶失活了，切乙個星期都沒用，建議換另外實驗室的試一下。
11樓：匿名使用者
你的引物含有claⅰ的酶切位點嗎？用載體上的其他酶切位點，雙酶切鑑定下看看。也許酶有問題。
質粒pcr結果很好，為什麼酶切卻做不出來
12樓：完玉花薛珍
pcr非常靈敏，你做連線的時候連線產物就是目的片段和載體，轉化的時候連線產物混到感受態細胞裡，塗板的時候，那些沒連線進去的目的片段dna則存在於你的平板上，菌落上自然也有，而挑菌落的時候則把把這些dna帶到了試管或者三角瓶裡，提質粒的時候它們因為很短，自然不會被蛋白質細胞器基因組dna沉澱帶走，最後和陰性質粒一起再接受pcr，所以出了假陽性。
這也是為什麼菌落pcr的假陽性遠遠高於菌液pcr的原因，一般菌液pcr不容易遇到假陽性的，尤其做了藍白篩選或者用了帶有致死基因的轉殖載體，不過送去測序之前都最好經過酶切確認。
13樓：虢景明昝儀
既然你的質粒已經提出來了，那麼感受態、轉化等因素就不必再考慮了。
你看看雙酶切後載體的位置有幾條帶，如果是兩條，那說明酶切不完全，如果是一條，那說明酶切效率沒問題。
pet28a分子量為，你的插入片段為500bp，如果你的質粒完全切開，載體和插入片段的摩爾比為1：1，質量比就是5.
6k：，跑膠後兩條帶的亮度比就是10:
1，所以你目的條帶很淡非常正常。
換句話說，你的實驗一切正常，那條500bp的條帶可能本來就應該那麼淡。
近期在質粒構建是pcr和酶切後都有目的條帶，但是就是連線轉化後沒有點，或者有點但是是陰性的，哪有問題
14樓：匿名使用者
都有可能。
你可以多做幾個對照，如空載體轉化、空細胞塗板等等，幫助縮問題小範圍你可以詢問實驗室其他人員，看看酶是否有問題，感受態是否有問題，抗生素是否有問題，等等。
按你給的線索，菌落很少，很有可能是切開的線性質粒沒有連上片段，轉不進細胞，少量沒有切開的空載體轉進細胞，形成陰性菌落。問題可能在片段酶切上，建議連t載體再切，或雙酶切換成兩步單酶切，或換酶切位點，或重新設計保護鹼基。
15樓：網友
連t載體拿去測序 看p出來的是不是你要的條帶 要麼就是質粒酶切的之後**的不好 最好在旁邊跑一道沒有切的質粒 這樣能看出來哪條帶是切開的質粒。
我的3個質粒測序結果都正確，但是做雙酶切結果只有乙個能切下來dn**段，為什麼呢?
16樓：匿名使用者
你重組質粒的宿主菌是一樣的嗎，如果宿主菌是bl21，那麼提取的質粒是不能直接酶切的。需要**質粒後才能被酶切開。。
17樓：不如水昔
這個可能性太多了吧。
這個不好說啊。你得乙個條件乙個條件的排除。
干擾載體小抽酶切和測序都正確 但是大抽酶切不對 為什麼
18樓：活寶冰雨夢悠悠
為什麼可以用不同的限制酶來切目的基因和載體？ -我們首先要明白酶切的目的是什麼！其實就是把質粒切開乙個缺口，好讓目的基因進入！
而採用不同限制酶的原因是：載體上可用到的位點較少，確定載體需要的位點之後，再觀察目的基因，但是載。
在基因表達構建載體中什麼切割質粒什麼切割目的基因，為什麼
墨漪薊憐南 識別序列有區別 g gatcc 限制酶1,2都可以切，但是 gatc 只能有酶2切。懂了麼，就是說酶一要識別出6個鹼基這樣的排序才能切，但是酶二只需要識別出4個這樣的排序，酶二的選擇性比較低。然後，請給我題目裡的那張圖 是否在標記基因中存在gatc的序列呢，如果有，酶二會去把他切斷，所以...
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