馬鈴薯培養基的製作過程

1樓：索萊寶生物

材料：馬鈴薯20g、蔗糖 2g、自來水 100ml、瓊脂 2g、ph 自然(約6.0)

滅菌：1.05kg/cm2，20min

馬鈴薯處理方法:

馬鈴薯去皮，切成塊加水，煮沸30min(注意火力的控制，可適當補水) ，用紗布過濾，濾液加糖，補足水至100ml，裝入三角瓶。

綜合馬鈴薯培養基 20%馬鈴薯煮汁 1000 毫公升磷酸二氫鉀 3克硫酸鎂 1.5克葡萄糖 20克維生素 10毫克瓊脂 18克先配製20%馬鈴薯煮汁，方法同上。在煮汁中加入上述各種組分，加熱溶解後補足水分，調整ph值到6。

分裝，滅菌，備用。該培養基用於培養和儲存靈芝、平菇、香菇等食用菌菌種。馬鈴薯糖瓊脂培養基把馬鈴薯洗淨去皮，取200克切成小塊，加水1000毫公升，煮沸半小時後，補足水分。

在濾液中加入10克瓊脂，煮沸溶解後加糖20克(用於培養黴菌的加入蔗糖，用於培養酵母菌的加入葡萄糖)，補足水分，分裝，滅菌，備用。把這培養基的ph值調到7.2～7.

4，配方中的糖，如用葡萄糖還可用來培養放線菌和芽孢桿菌。按所用原料不同，可分為兩類：應用肉湯、馬鈴薯汁等天然成分配製的，稱為天然培養基;應用化學藥品配成並標明成分的，稱為合成培養基或綜合培養基。

馬鈴薯培養基就是天然培養基，綜合馬鈴薯培養基就是人工合成的。

不同的生物需要不同培養基，注意配方的選取，稱取要準確，誤差不能太大對於特殊物品，不能滅菌的要用過濾方法除菌。配好後高溫高壓滅菌，可以在室溫下放置很久，如果開啟使用過一次，請放置冰箱。如果長時間不用，一定要重新配置，不能拿以前的用來培養，避免汙染。

培養基的製備程式不同型別培養基製備的程式也不盡相同。但一般培養基的程式主要可分為：配料、溶化、矯正ph、澄清過濾、分裝、滅菌及檢定等8個步驟。

(一)配料

按培養基處方準確稱取各種成分，先在三角燒瓶中加入少量蒸餾水，再加入各種成分，以防蛋白腖等粘附於瓶底，然後再以剩餘的水沖洗瓶壁。

(二)溶化

將各種成分混勻於水中，最好以流通蒸氣溶化半小時，如在電爐上溶化應隨時攪拌，如有瓊脂成分時更應注意防止外溢。溶化完畢，補足失去的水分。

(三)矯正ph

1.ph測定

取與標準管同口徑的試管(通常用華氏試管)3支，於第1、3管各加入欲測定ph的的培養基5ml，並於第一管中加入0.2g/l的酚紅0.25ml作為測定管，混勻;於第2管加入蒸餾水5ml，第4管為ph標準比色管。

2.ph的校正

若測定管過酸或過鹼可用0.1mol/l氫氧化鈉或0.1mol/l鹽酸溶液矯正，直至顏色與標準管相同為止，加鹼或加酸時要精確緩慢，每加1滴後要充分混勻，比色後再加第2滴(有時僅加半滴)準確記錄加入的量。

3.計算

設5ml培養基矯正ph至7.4時需0.1mol/l氫氧化鈉0.15ml，現有培養基4990ml，需加氫氧化鈉的量可按下列方法計算：5∶4990=0.15∶x

x=0.15×4990/5=149.7(ml)

如將此0.1mol/l的氫氧化鈉改用1mol/l的氫氧化鈉時，則需14.9ml即可。

(四)過濾澄清

培養基配製後一般都有沉渣或混濁出現，需過濾成清晰透明後方可使用，常用的過濾方法如下：

1.液體培養基

液體培養基必須清晰，以便觀察細菌的生長情況，常用濾紙過濾，亦可在加熱前加入用水稀釋的雞蛋白(1000ml培養基用1個雞蛋白)在100℃加熱後保持60～70℃40～60分鐘，使其不溶性物質附於凝固的蛋白上而沉澱，然後再用虹吸法吸出上清液或以濾紙過濾。

2.固體培養基

如係瓊脂培養基，於加熱融化後需趁熱以絨布或兩層紗布中夾脫脂棉過濾;亦可用

自然沉澱法，即將瓊脂培養基盛人鋁鍋或廣口搪瓷容器內，以高壓(103.43kpa)蒸汽融化15分鐘後，靜置高壓鍋內過夜，次日將瓊脂傾出，用刀將底部沉渣切去，再融化即可收清晰的瓊脂培養基。

(五)分裝

1.根據需要將培養基分裝於不同容量的三角燒瓶、試管中。分裝的量不宜超過容器的2/3以免滅菌時外溢。

2.瓊脂斜面分裝量為試管容量的1/5，滅菌後須趁熱放置成斜面，斜面長約為試管長的2/3.

3.半固體培養基分裝量約為試管長的1/3，滅菌後直立凝固待用。

4.高層瓊脂分裝量約為試管的1/3，滅菌後趁熱直立，待冷後凝固待用。

5.液體培養基分裝於試管中，約是試管長度的1/3.

6.瓊脂平板：將滅菌(或加熱融化)後的培養基冷至50℃左右，以無菌手續傾人滅菌平皿內，內徑225px的平皿傾注培養基約13～15ml，輕搖平皿底，使培養基平鋪於平皿底部，待凝固後即成，傾注培養基時，切勿將皿蓋全部啟開，以免空氣中塵埃及細菌落入。

新製成的平板培養基(簡稱平板)，表面水分較多，不利於細菌的分離，通常應將平皿倒扣擱置於37℃培養箱內約30分鐘待平板平面乾燥後使用。