1樓:汲夢絲
最好是從mrna中得到,因為提取的染色體dna包含了外顯子和內含子,所以想要得到全長的基因序列不是很容易,因為基因都是一段一段分離的,不過mrna反轉的cdna就是連線在一起的完整基因了。你所說的只適合得到原核的基因。真核的還是不要這樣操作了。
2樓:希望無所謂
要從浩瀚的“基因海洋”中獲得特定的目的基因,猶如大海撈針,是十分不易的。科學家們經過不懈地探索,想出了許多辦法,概括地說,主要有兩條途徑:一條是從供體細胞的dna中直接分離基因;另一條是人工合成基因。
直接分離基因最常用的方法是“鳥槍法”,又叫“散彈射擊法”。這種方法猶如用獵槍發射的散彈打鳥,無論哪一顆彈粒擊中目標,都能把鳥打下來。鳥槍法的具體做法是:
用限制酶將供體細胞中的dna切成許多片段,將這些片段分別載入運載體,然後通過運載體分別轉入不同的受體細胞,讓供體細胞所提供的dna(外源dna)的所有片段分別在各個受體細胞中大量複製(在遺傳學中叫做擴增),從中找出含有目的基因的細胞,再用一定的方法把帶有目的基因的dn**段分離出來。如許多抗蟲、抗病毒的基因都可以用上述方法獲得。
用“鳥槍法”獲取目的基因的缺點是工作量大,具有一定的盲目勝。又由於真核細胞的基因含有不表達的dn**段,不能直接用於基因的擴增和表達,因此,在獲取真核細胞中的目的基因時,一般是用人工合成基因的方法。
3樓:匿名使用者
可以。利用pcr方法,只要你有目的基因的引物,可以直接克隆出來。
不過找目的基因就麻煩了
目的基因的定位是什麼意思 能不能用運載體來完成
4樓:匿名使用者
一、目的基因的定義:把需要研究的基因稱為目的基因。(一般把需要分析的基因稱靶基因,在基因克隆過程中有時兩者均稱為插入基因,有時三者含義相近。)
二、目的基因的製備:
(一)從細胞核中直接分離
簡單的原核生物目的基因可從細胞核中直接分離得到,但人類的基因分佈在23對染色體上,較難從直接法中得到。
(二)染色體dna的限制性內切酶酶解
ii型限制性內切酶可專一性地識別並切割特定的dna順序,產生不同型別的dna末端。若載體dna與插入的dn**段用同一種內切酶消化,或靶dna與載體dna末端具有互補的粘性末端,可以直接進行連線。
(三)人工體外合成
簡短的目的基因可在瞭解dna一級結構或多肽鏈一級結構氨基酸編碼的核苷酸序列的基礎上人工合成。
(四)用逆轉錄酶製備cdna
大多數的目的基因是由mrna合成cdna(反轉錄dna)得到。從rna入手,先從細胞提取總rna,然後根據大多數真核mrna含有多聚腺嘌呤(polyadenylic acid ,polya)尾的特點,用寡聚dt纖維素柱將mrna分離出,以mrna為模板,在多聚a尾上結合12-18個dt的寡聚dt片段,作為合適的起始引物,在逆轉錄酶作用下合成第一條 圖10-39 目的
基因的製備
cdna鏈。用鹼或rna酶水解除去mrna,再用dna聚合酶,最好是klenow片段合成第二條dna鏈。雙鏈合成後,用s1核酸酶切去髮夾結構,即可獲得雙鏈cdna。
cdna用於探針製備、序列分析、基因表達等研究。因此以cdna為研究材料,反映了mrna的轉錄及對以後翻譯的影響情況,即反映某一基因(dna)外顯子的情況。
"目的基因的定位"是什麼意思
5樓:公考路上的人
一、目的基因的定義:把需要研究的基因稱為目的基因.(一般把需要分析的基因稱靶基因,在基因克隆過程中有時兩者均稱為插入基因,有時三者含義相近.)
二、目的基因的製備:
(一)從細胞核中直接分離
簡單的原核生物目的基因可從細胞核中直接分離得到,但人類的基因分佈在23對染色體上,較難從直接法中得到.
(二)染色體dna的限制性內切酶酶解
ii型限制性內切酶可專一性地識別並切割特定的dna順序,產生不同型別的dna末端.若載體dna與插入的dn**段用同一種內切酶消化,或靶dna與載體dna末端具有互補的粘性末端,可以直接進行連線.
(三)人工體外合成
簡短的目的基因可在瞭解dna一級結構或多肽鏈一級結構氨基酸編碼的核苷酸序列的基礎上人工合成.
(四)用逆轉錄酶製備cdna
大多數的目的基因是由mrna合成cdna(反轉錄dna)得到.從rna入手,先從細胞提取總rna,然後根據大多數真核mrna含有多聚腺嘌呤(polyadenylic acid ,polya)尾的特點,用寡聚dt纖維素柱將mrna分離出,以mrna為模板,在多聚a尾上結合12-18個dt的寡聚dt片段,作為合適的起始引物,在逆轉錄酶作用下合成第一條 圖10-39 目的基因的製備cdna鏈.用鹼或rna酶水解除去mrna,再用dna聚合酶,最好是klenow片段合成第二條dna鏈.
雙鏈合成後,用s1核酸酶切去髮夾結構,即可獲得雙鏈cdna.cdna用於探針製備、序列分析、基因表達等研究.
為什麼目的基因不能直接插入載體?
6樓:然如是
插?怎麼插?
運載體多為質粒,是很穩定且牢固的環狀dna。
dna分子就像梯子,梯子的扶手由磷酸二酯鍵構成,非常牢固,要限制性內切酶才能切開。
切開後質粒會出現兩個粘性末端,所以必須用相同的內切酶切下目的基因,這樣目的基因和
粘性末端才能接合。
7樓:一思三千
要先用限制內切酶處理目的基因和載體,使它們露出相同的粘性末端(基本上都是粘性末端,平末端較少),這樣才能使目的基因和載體兩者的末端很好的拼合在一起。否則接不上。
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