1樓:我們的喵喵
接著繼續完善,通過設計引物,並利用pcr將模板擴增出來,然後去掉模板,剩下來的就是我們的pcr產物,在pcr產物上就已經把這個點變過來了,然後再轉化,篩選陽性轉殖,再測序確定就行了。
定點突變的意義
2樓:春日野穹
根據生物學理論知識,基因會發生突變,突變可以自發,也可以誘發。但在加拿大生物化學家m·史密斯(1932-2023年)發明定點突變法之前,突變株的產生必須經由自然界或用化學等方法誘使基因體突變。這類方法屬於隨機突變,突變株必須在生物形狀上有所改變,才能確定有突變發生,但除非用分子生物方法或遺傳方法找到此突變處,否則無法確定突變位置。
也就是說,這種突變是盲目的。而史密斯發明的定點突變法卻是有目的的,該法可經由設計好的寡核苷酸,在任何乙個基因片段上進行隨意或設計好的突變,也就是說,這種突變是預先設定好的,所以也有人將該法稱為「反遺傳法」。
什麼是定點突變
定點突變的用途
3樓:點點犬吠
有意思的是這一給生命科學研究及應用領域帶來革命性突破的方法竟然是史密斯和其同事在喝咖啡時閒聊出來的。幾乎每個生物實驗室都會用定點突變法來研究基因或蛋白質的功能。定點突變法的應用不僅廣泛用於基因工程技術領域,還可用於農業培育抗蟲、抗病的良種,用於醫學矯正遺傳病、**癌症等病。
定點突變的介紹
4樓:咖啡i烚
體外定點突變技術是當前生物、醫學各領域研究中的一種重要實驗手段,是改造、優化基因的便捷方案,是探索啟動子調節位點的有效手段,也是研究蛋白質結構和功能之間的複雜關係的有力工具。
蛋白質的結構決定其功能,二者之間的關係是蛋白質組研究的重點之一。對某個已知基因的特定鹼基進行定點改變、缺失或者插入,可以改變對應的氨基酸序列和蛋白質結構,對突變基因的表達產物進行研究有助於人類了解蛋白質結構和功能的關係,**蛋白質的結構/結構域。而利用定點突變技術改造基因:
比如野生型的綠色螢光蛋白(wtgfp)是在紫外光激發下能夠發出微弱的綠色螢光,經過對其發光結構域的特定氨基酸定點改造,gfp能在可見光的波長範圍被激發(吸收區紅移),而且發光強度比原來強上百倍,甚至還出現了黃色螢光蛋白,藍色螢光蛋白等等。定點突變技術的潛在應用領域很廣,比如研究蛋白質相互作用位點的結構、改造酶的不同活性或者動力學特性,改造啟動子或者dna作用元件,引入新的酶切位點,提高蛋白的抗原性或者是穩定性、活性、研究蛋白的晶體結構,以及藥物研發、基因**等等方面。
定點突變的流程
5樓:王者
定點突變一般須有含有待突變基因的高純度質粒,不少於10μg,電泳圖清晰,達酶切及測序要求;
1.對待突變基因測序結果進行分析,設計突變方案;
2.根據突變方案設計合成覆蓋突變位點的雙向引物,合成目的dna兩端引物,進行高保真pcr反應;
3.預設情況下,將pcr產物轉殖至t載,或者根據要求亞轉殖至目的載體;dna測序驗證突變序列的正確性。
定點突變的多點突變
6樓:哆姐
不同於定點突變的是基於pcr的隨機突變,通過改變pcr條件提高pcr過程中的隨機出錯,這種方法適用於未知的蛋白質,作全域性性分析,所以有人稱為飽和突變(saturation mutagenesis)。不過這種方法由於沒有目的性,分析操作相當繁瑣,並且不會出現乙個位點2個以上鹼基突變,因而應用上有侷限性。定點突變適用於蛋白結構已有初步了解的基因,比pcr隨機突變更有目的性,也更為精確,簡單,同時改造基因更加「隨心所欲」。
由於定點突變技術在蛋白質組學中有這非常廣泛的應用前景,相信這個技術在不遠的將來還會有更大的改進和發展,也必將為更多人熟悉應用。
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