做不同的PCR要用不同的體系嗎?

時間 2023-03-18 03:30:06

1樓:藍色葡萄風信子

當然要用不同的體系。

不同的模板不一樣的反應體系。

模板不一樣。

引物也不一樣。

tm值鎂離子濃度都不一樣。

做不出來的原因太多了。

一般的要做乙個正交的反映體系優化。

不同的影響因素做正交設計。

達到擴增的最佳效果。

2樓:乘龍

主要看你的片段大小,需不需要高保真,等等條件。

不同體系最重要的就是酶不同,根據酶不同所用的buffer、離子什麼的條件也不一樣。

不妨把你的片段大小和你的體系貼出來,大家試著幫你分析一下原因。

什麼是pcr技術?

3樓:匿名使用者

pcr實際上是在體外模擬dna體內複製的過程。和體內dna複製一樣,pcr在擴增dna的時候也會經歷dna雙鏈的解開(變性),寡聚核酸與單鏈dna的結合(退火),以及dna聚合酶開始合成dna(延伸)的三個過程。但pcr和體內dna複製不同,在體內dna的複製整個過程是由一系列酶所控制的,所以像dna解鏈等在體溫下就可以完成。

而pcr則需要乙個高溫來完成dna的解鏈,所以pcr反應的dna taq聚合酶是耐高溫的酶。此外,無論體內或者pcr反應,dna的合成都需要一小段寡聚核酸作為引物提供3『羥基末端,以讓dna聚合酶識別並開始合成dna.在體內這個3』羥基末端是由寡聚的rna提供,而在pcr中則由寡聚的dna提供,因為dna分子比rna分子穩定易於儲藏和使用。

在體內雙鏈dna聚合方向是5『-3』的,其中一條鏈是5『-3』,而另外一條鏈雖然也是5『-3』,但它是由岡崎片段連線起來的,而總體的合成方向是3『-5』.在pcr反應中,每一條鏈的合成方向都是5『-3』,沒有類似岡崎片段的東西。在體內,dna聚合是從複製起始位點開始的,由聚合酶識別複製起始位點。

而在pcr反應中,dna的聚合是從引物結合處開始的,主要是由引物的特異性來控制複製的起始位置。基本上就是這樣了。我們是驗室用biog kit做pcr實驗檢測目標rna,做下來s型曲線的起跳值在28左右。

4樓:北京理工大學出版社

pcr技術也就是基因擴增技術,它是通過基因擴增儀,在細胞外進行dna複製,由1個dna分子增加到2個,然後依次增加到4個,8個…,使分子數目呈幾何級數增加,以在短時間內獲得足夠的dna,供研究用的一種技術。

pcr技術的出現,使生物學的研究一大突破。在pcr技術問世之前,人們無法查出愛滋病病毒感染者,因為這種病毒在感染者體內的含量很少,且難於培養。在pcr技術問世之後,可將愛滋病病毒的核酸進行擴增從而查出受感染者,並可研究**方法。

pcr技術已經在分子生物學中發揮了重要作用。可以預知,它在遺傳病診斷、**,在動、植物育種,以及在司法破案等方面,將會發揮更大的作用。

5樓:倚樓丶丶聽風雨

pcr技術的原理是什麼。

什麼叫pcr技術?

6樓:倚樓丶丶聽風雨

pcr技術的原理是什麼。

7樓:匿名使用者

實時檢測pcr擴增,在。

bai擴增的指數期du對起始模zhi板進行定量dao,在擴增過程中,螢光專訊號隨著pcr產物的屬增加而增強。我們實驗室使用的bioghsc super probe kit pcr實驗檢測dna,測得的迴圈數在28左右,整個pcr過程有4個階段,基線期---指數增長期---線性增長期---平台期,指數增長期內,pcr有高度重複性,一般的檢測指標是看線性圖譜的擴增曲線的起跳值(ct值)。

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