1樓：匿名使用者
有的客戶想用測序的方法檢測點突變體，我們認為該方法可靠性不高。主要有以下兩個原因。首先，我們並不清楚突變的序列與正常的序列的比例是多少。
測序反應 的訊號強度直接與模板的量有關，如果突變的模板所佔的比例很少，將直接作為背景噪音了，很難檢測出來。只有當測序反應體系中正常的和突變的模板量比較接近 時，才能較可靠地檢測到突變體的存在。其次，在同一位置，不同鹼基的訊號強度一般是不一樣的。
這樣即使突變的模板所佔的比較較高時，也不一定能準確檢測到 突變的存在。另外，測序儀是設計用來測序正常的鹼基序列的，軟體在對掃瞄的結果進行處理時，會盡量提高主峰而將背景訊號盡量壓低，以得到盡可能好的結果。 因此，當某處出現雙峰時，測序儀一般會認為訊號弱的峰為背景訊號，在處理過程中，將弱的峰進一步壓低，這樣根部不立於突變體的檢測。
因此認為，用測序的方 法檢測突變體的存在不是乙個好的方法。--------**三博遠志**(測序faq)
2樓：匿名使用者
還可以吧 只不過定點突變之後測序發現突變的不止是要突變的單個點 可能會發生多點突變 建議使用高保真的taq酶
為什麼sanger測序前50bp測得不准
3樓：黑傘下的光明
1、除了cnv有一定的誤差外，絕大多數snp本身就是測序找到的現有的資料庫也是依據測序，發現新的snp都要提供測序資料2、測序的訊號和模板強度，你因該說是兩條鏈的比例吧，還有測序資料要做snp首先是要做評接，國際通用的phred-phrap-polyphred
包，不是那眼看的，你第二點所說只能是個人認識，和技術無關總體說，新的snp發現還是需要測序，不論第一代還是第二代，如果做分型，很多方法都可以，各有利弊
ckit基因突變檢測陰性
4樓：楊風遊
目的:研究分析胃腸道間質瘤(gist)中c-kit基因及pdgfrα基因突變特點,**其與腫瘤原發部位、臨床病理特點及預後的可能關係。 方法:
用pcr擴增和基因測序的方法檢測50例胃腸道間質瘤組織中c-kit基因第9,11,13外顯子和pdgfra基因第12,18外顯子的序列,分析胃腸道間質瘤基因突變的發生規律,結合患者臨床特徵及隨訪資料,**基因突變與胃腸道間質瘤臨床特點及預後之間的關係。 結果:在50例gist中共檢測到c-kit基因突變32例,佔64%,其中11號外顯子突變30例,占有突變病例的88.
2%;9號外顯子突變1例,佔2.94%;13號外顯子突變1例,佔2.94%。
絕大多數為雜合性突變,僅2例為純合性突變。11號外顯子突變方式以點突變最常見,佔50%(15/30),其次為缺失突變11例占36.7%(11/30)和插入突變4例占13.
3%(4/30)。突變位點多集中在5′端的經典熱區,其次為3′端的框內串聯重複。pdgfrα基因的突變共檢測到2例占無c-kit突變病例的11.
1%(2/18),佔cd117陰性gist的50%(2/4),外顯子18的突變1例,外顯子12突變1例。比較gist的基因突變率在不同組別中的差異(腫瘤原發部位、年齡、性別、腫瘤大小、細胞形態、核**、惡性潛能分級)。胃gist的總突變率及c-kit外顯子11突變率較其他部位gist高,差異具有顯著性(χ~2=5.
061,p=0.024;χ~2=7.346,p=0.
007),(χ~2=4.20,p=0.04;χ~2=8.
75,p=0.013)。梭行細胞型腫瘤,突變率較其上皮細胞型及混合細胞型兩組為高,差異具有顯著性(χ~2=8.
324,p=0.016;χ~2=6.380,p=0.
041)。gist的基因突變率及突變方式與年齡、性別、腫瘤大小、核**、惡性潛能分級等均無顯著性關係。 結論:
1.大部分的gist存在c-kit基因的突變,在無c-kit基因突變的gist中有一部分存在pdgfrα基因的突變。 2.
c-kit基因突變主要集中在第11號外顯子。突變的方式頻率由高到低依次為點突變、缺失突變和串聯重複插入。 3.
胃gist中c-kit exon11突變率較小腸、結直腸及胃腸道外gist的突變率高。 4.梭型細胞型gist總突變率及c-kit exon11突變率較上皮細胞型及混合細胞型gist高。
5.c-kit基因突變率及突變方式與gist的大小、核**相、惡性潛能及預後沒有顯著性關係。
請問各位生物大俠,一代測序技術包括哪些呢,能詳細點嗎?
5樓：匿名使用者
包括sanger測序，str親子鑑定、法醫鑑定，snapshot測序技術，實時螢光定量pcr。
上個世紀末90年代，與「曼哈頓原子彈計畫」和「阿波羅登月計畫」具有同樣劃時代意義的「人類基因組計畫」啟動，這是人類第一次在分子水平上全面地認識自我。隨著人類基因組計畫的開展，人們對基因與疾病的關係認識更加深入，有機會通過對基因缺陷的檢測分析來判斷各種疾病發生的風險，並由此衍生出一種新的健康服務專案—基因測序。
sanger測序經過38年的發展已相當完善，成本也降低了10倍以上，現在國際上仍然是基因測序行業的金標準和主力軍。sanger測序是目前所有基因測序的國際金標準，是包括螢光定量pcrtaqman探針法、普通pcr法、晶元法、二代測序法、質譜法等方法的金標準。
2023年以來，出現了很多新一代測序儀產品，新一代測序成本低、資料大、速度快，但都有待成熟，準確度不夠高。
（一）、sanger測序
被檢測的dna鹼基順序依次讀出800bp以上，是一代所有測序和新一代所有測序的金標準。代表儀器美國abi3730xl，sanger測序一般醫院很少開展，開展的都發公司做。耗時長達 13年之久的人類基因組計畫也是依靠sanger測序法才得以最終完成的。
sanger 測序是針對已知致病基因的突變位點設計引物，進行pcr 擴增直接測序。單個突變點的擴增（包括該位點在內的外顯子部分片段的擴增），不必將該點所在基因的全部外顯子都擴增。所以單基因或部分基因控制的疾病樣本檢測，sanger 測序可以發揮精準和成本低的優勢。
（二）、str親子鑑定、法醫鑑定
通過測定dn**段的長度和顏色，來確定遺傳關係。是sanger測序技術基礎上，發展起來的乙個技術，所用儀器與sanger測序所用儀器一樣，檢測原理一樣，一台裝置裝兩套檢測軟體，一台儀器具有三個功能。代表儀器美國abi 3130、3130xl、3730儀器，一般司法機構和sanger測序公司擁有該儀器，醫院沒有。
親子鑑定就是通過對dna遺傳片段檢測，判定父母與子女之間的親緣關係。
（三）、snapshot測序技術
snapshot技術是美國應用生物公司（abi）開發，是螢光標記單鹼基延伸的分型技術，也稱小測序，主要針對中等通量的snp突變分型專案檢測。通常用於10~30個snp突變位點分析。是sanger測序技術基礎上，發展起來的乙個技術，和sanger測序儀器一樣，檢測原理一樣，一台裝置裝有兩套檢測軟體，一台儀器具有三個功能。
代表儀器美國abi3130、3130xl、3730儀器，一般sanger測序公司擁該有儀器。
優勢：1、分型準確，2、通量高，3、檢測速度快，4、不受snp位點多型性特性限制，5、不受樣本個數限制。snapshot技術是新一代測序技術（包括二代測序和晶元測序）snp突變檢測的金標準，sanger測序技術又是snapshot技術突變檢測的金標準。
（四）、實時螢光定量pcr
利用螢光訊號積累實時監測整個pcr過程，最後通過標準曲線（或者與內參對照）對未知模板進行定量分析。代表儀器美國abi 7500螢光定量pcr儀等，一般三甲醫院都有該類儀器，普及較好。使用方便維護簡單。
1、突變尋找：定量pcr taqman探針雜交。2、基因定量：
相對螢光定量pcr，醫學上用來檢測細菌或病毒rna的表達量。螢光定量pcr是1996 年由美國abi 公司推出的一種新定量實驗技術。
實時螢光定量pcr應用領域：臨床疾病診斷：各型肝炎、愛滋病、禽流感、結核、性病等傳染病診斷和療效評價，地中海貧血、血友病、性別發育異常、智力低下綜合症、胎兒畸形等優生優育檢測，腫瘤標誌物及瘤基因測序，遺傳基因測序。
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