1樓:
olin—酚試劑法(lowry法)
這種蛋白質測定法是最靈敏的方法之一。過去此法是應用最廣泛的一種方法,由於其試劑乙的配製較為困難(現在已可以訂購),近年來逐漸被考馬斯亮蘭法所取代。此法的顯色原理與雙縮脲方法是相同的,只是加入了第二種試劑,即folin—酚試劑,以增加顯色量,從而提高了檢測蛋白質的靈敏度。
這兩種顯色反應產生深蘭色的原因是:?在鹼性條件下,蛋白質中的肽鍵與銅結合生成複合物。 folin—酚試劑中的磷鉬酸鹽—磷鎢酸鹽被蛋白質中的酪氨酸和苯丙氨酸殘基還原,產生深蘭色(鉬蘭和鎢蘭的混合物)。
在一定的條件下,蘭色深度與蛋白的量成正比。 folin—酚試劑法最早由lowry確定了蛋白質濃度測定的基本步驟。以後在生物化學領域得到廣泛的應用。
這個測定法的優點是靈敏度高,比雙縮脲法靈敏得多,缺點是費時間較長,要精確控制操作時間,標準曲線也不是嚴格的直線形式,且專一性較差,干擾物質較多。對雙縮脲反應發生干擾的離子,同樣容易干擾lowry反應。而且對後者的影響還要大得多。
酚類、檸檬酸、硫酸銨、tris緩衝液、甘氨酸、醣類、甘油等均有干擾作用。濃度較低的尿素(0.5%),硫酸納(1%),硝酸納(1%),三氯乙酸(0.
5%),乙醇(5%),乙醚(5%),丙酮(0.5%)等溶液對顯色無影響,但這些物質濃度高時,必須作校正曲線。含硫酸銨的溶液,只須加濃碳酸鈉—氫氧化鈉溶液,即可顯色測定。
若樣品酸度較高,顯色後會色淺,則必須提高碳酸鈉—氫氧化鈉溶液的濃度1~2倍。 進行測定時,加folin—酚試劑時要特別小心,因為該試劑僅在酸性ph條件下穩定,但上述還原反應只在ph=10的情況下發生,故當folin一酚試劑加到鹼性的銅—蛋白質溶液中時,必須立即混勻,以便在磷鉬酸—磷鎢酸試劑 被破壞之前,還原反應即能發生。 此法也適用於酪氨酸和色氨酸的定量測定。
此法可檢測的最低蛋白質量達5mg。通常測定範圍是20~250mg。
2樓:乙熹羿懿
自己配太麻煩了一般是棕色試劑瓶,也不貴,你可以買配好的試劑,4度儲存
福林酚試劑配製中有什麼現象
3樓:匿名使用者
在熱回流過程中溶液一直是淡黃色的,回流結束後加入硫酸鋰和雙氧水後,再熱沸騰時候,溶液變成亮黃色了
4樓:oo咻
可能會有沉澱現象,不過不應該有沉澱。
福林酚方法中試劑甲的作用是什麼?為什麼需要此步設計
5樓:姆子資園
在2公升磨抄口回流瓶中,加入bai100克鎢酸鈉(na2wo4·2h2o),25克鉬酸鈉(na2moo4·2h2o)及
du700毫公升蒸餾水,再加zhi50毫公升85%磷酸,100毫公升濃鹽酸,充分dao混合,接上回流管,以小火回流10小時,回流結束時,加入150克 硫 酸 鋰(li2so4),50毫公升蒸餾水及數滴液體溴,開口繼續沸騰15分鐘,以便驅除過量的溴。冷卻後溶液呈黃色(如仍呈綠色,須再重複滴加液體溴的步驟)。稀釋至1公升,過濾,濾液置於棕色試劑瓶中儲存。
使用時用標準naoh滴定,酚酞作指示劑,然後適當稀釋,使最終的酸濃度為2mol/l左右。
感覺這樣的提問是沒有意義的
還是自己找下資料吧
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