靈敏度高的檢測蛋白質方法

時間 2025-04-16 18:35:13

1樓:朔犬

凱氏定氮 靈敏度低,適用於 氮,誤差為 ±2% 費時。

8~10小時 將蛋白氮轉化為氨,用酸吸收後滴定 非蛋白氮(可用三氯乙酸沉澱蛋白質而分離) 用於標準蛋白質含量的準確測定;干擾少;費時太長。

雙縮脲法(biuret法) 靈敏度低 1~20mg 中速 20~30分鐘 多肽鍵+鹼性cu2+®紫色絡合物 硫酸銨;tris緩衝液;某些氨基酸 用於快速測定,但不太靈敏;不同蛋白質顯色相似。

紫外吸收法 較為靈敏 50~100mg 快速 5~10分鐘 蛋白質中的酪氨酸和色氨酸殘基在280nm處的光吸收 各種嘌吟和嘧啶;

folin-酚試劑法(lowry法) 靈敏度高 ~5mg 慢速 40~60分鐘 雙縮脲反應;磷鉬酸-磷鎢酸試劑被tyr和phe還原 硫酸銨;tris緩衝液;甘氨酸;

各種硫醇 耗費時間長;操作要嚴格計時;顏色深淺隨不同蛋白質變化。

考馬斯亮藍法(bradford法) 靈敏度最高 1~5mg 快速5~15分鐘 考馬斯亮藍染料與蛋白質結合時,其lmax由465nm變為595nm 強鹼性緩衝液;

sds 最好的方法;干擾物質少;顏色穩定; 顏色深淺隨不同蛋白質變化。

2樓:網友

1.如果是考馬斯亮藍染色,試試銀染。

2.試試濃縮,純化之後行不行。

實驗中如何提高測定蛋白質的準確度?

3樓:自樂自娛自樂

1 標準曲線的製備:使用標準品製備標準曲線,以確定待測樣品中的蛋白質含量。標準曲線應該涵蓋待測樣品中預期的蛋白質含量範圍,並且應該與待測樣品同步準備。

2 使用多種測定方法:不同的蛋白質測定方法具有不同的優點和缺點,組合使用可以提高準確度。例如,bca法和 bradford 法都是常用的蛋白頌神質測定方法,它們的靈敏度和特異性都有所不同。

3 控制實驗條件:在實驗前要野胡虧注意控制溫度、ph 值等因素,以保證實驗的可重複性。樣品處理和測定的過程也需要注意避免操作誤差,例如使用純化的蛋白質標準品作為參考物質,精確稱量待測樣品等。

4 重複測定:反覆測定每個樣品,以消除由於抽樣誤差、批次變異等做陸因素導致的誤差。建議至少進行3次測定並計算平均值。

5 檢查儀器:定期檢查和校準裝置,確保其正常工作。還應該進行質量控制測試,包括測定純化的蛋白質標準品。

總之,提高蛋白質測定的準確度需要注意實驗條件的控制、多種方法的組合使用、重複測定以及裝置的維護等方面。

哪種蛋白質含量測定法靈敏度最高

4樓:隆合英赧綢

凱氏定氮。靈敏度低,適用於。

氮,誤差為。

費時。8~10小時銀鬥。

將蛋白氮轉化為氨,用酸吸收後滴定。

非蛋白氮(可用三氯乙酸沉澱蛋白質而分離)

用於標準蛋白質含量的準確測定;干擾少;費時太長。

雙縮脲法(biuret法)

靈敏度低。1~20mg

中速。20~30分鐘。

多肽鍵+鹼性cu2+®紫色絡合物。

硫酸銨;tris緩衝液;某些氨基酸。

用於快速測定,但不太靈敏;不同蛋白質返搏鋒顯色相似。

紫外吸收法。

較為靈敏。50~100mg

快速。5~10分鐘。

蛋白質中的酪氨酸和色氨酸殘基在280nm處的光吸收。

各種嘌吟和嘧啶;

folin-酚試劑法(lowry法)

靈敏度高。5mg

慢速。40~60分鐘。

雙縮脲反應;磷鉬酸-磷鎢酸試劑被tyr和phe還原。

硫酸銨;tris緩衝液;甘氨酸;

各種硫醇。耗費時間長;操作要嚴格計時;顏色深淺漏晌隨不同蛋白質變化。

考馬斯亮藍法(bradford法)

靈敏度最高。

1~5mg快速5~15分鐘。

考馬斯亮藍染料與蛋白質結合時,其lmax由465nm變為595nm強鹼性緩衝液;

sds最好的方法;干擾物質少;顏色穩定;

顏色深淺隨不同蛋白質變化。

5樓:烏半蓮閉珠

原理:苯丙氨酸和酪氨酸含有苯環,苯環與硝酸作用產生黃色物質。而這兩種氨基酸是基本氨基酸,是構成蛋白質的常見氨基酸,所以蛋白質也會有黃色反應。

操作方法:在試管里加少量蛋白質溶液,然後加幾滴濃硝酸溶液,微熱,觀察現象。

實驗現象:有黃色沉澱析出。

注意卜侍事項:濃硝酸濃度不應低於40%

這個方法是作為蛋白質的定性試驗,一般不用它來測定蛋白質含量,原因是不知道乙個蛋白質裡面含有多少苯丙氨酸乎弊型和酪氨酸,靈敏度很高,但是不存在定量範圍這一說。如果要定量,現在通用的是考馬歲猜斯亮藍法(bradford法)。

簡述檢測蛋白質磷酸化的檢測方法及其原理

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