1樓：飄渺羽葉
方法及原理：
1.激酶活性分析
生物學樣品中的激酶活性通常是在體外測定的，在atp的存在下將免疫沉澱的激酶與外源底物共同孵育。之後通過一些報告系統來評估特定激酶對底物的磷酸化，包括顯色、放射性或螢光檢測。
直接測定蛋白磷酸化的一種經典方法是將整個細胞與放射性標記的32p-磷酸鹽共同孵育，獲得細胞提取物，通過sds-page分離，並**在膠片上。這種繁瑣的方法需要多次幾小時的孵育，且使用放射性同位素。其他傳統方法包括2d凝膠電泳，這種技術假定磷酸化會改變蛋白的遷移率和等電點。
2.westernblot
利用sds-page分離生物樣品，隨後轉移到膜上（通常是pvdf或尼龍膜），之後利用磷酸化特異的抗體來鑑定目的蛋白。
由於測得的磷酸化蛋白水平可能隨處理或凝膠上樣誤差而變化，研究人員常常利用乙個抗體來檢測同源蛋白的總水平（而不考慮磷酸化狀態），以確定磷酸化組分相對於總組分的比例，並充當上樣內對照。化學發光和顯色法都很常用，而分子量marker常用來提供蛋白分子量的資訊。
3.酶聯免疫吸附分析（elisa）
elisa的定量能力優於westernblot，且在調節激酶活性和功能的研究中表現出巨大的作用。這種微孔板形式的分析一般利用目的蛋白特異的捕獲抗體，與磷酸化狀態無關。隨後讓目的蛋白結合在抗體包被的分析板中，目的蛋白可以是純的，也可以是複雜的異質樣品（如細胞裂解液）中的乙個組分。
加入待分析的磷酸化位點特異的檢測抗體。這些分析通常設計為顯色或螢光檢測。
4.基於細胞的elisa
來自目的蛋白的訊號可通過第二種蛋白來標準化，校正各孔之間的差異，實現磷酸化蛋白水平的準確評估，並比較多個樣品，與傳統免疫印跡中使用磷酸化特異和總蛋白抗體相似。這些分析繞過了製備細胞裂解液的需要，因此更適合高通量分析。
5.質譜
首先，磷酸化肽段的訊號通常較弱，因為它們帶負電荷，而電噴霧質譜在正電模式下作用，因此電離效果不好。其次，在大量非磷酸化蛋白的高背景之下，很難觀察到低豐度目的蛋白的訊號。
6.多個分析物圖譜分析
2樓：匿名使用者
1 磷酸化檢測可以用二級質譜啊，在正離子模式下，經過collision cell後中性丟失了98dalton（ser和thr）或216dalton（tyr）的肽段就可能是含乙個磷酸化位點的磷酸化肽段。
2 基本原理就是設計個bait將目的蛋白留在柱子上或沉澱下來。
蛋白質磷酸化調控基因表達的機制？你是如何理解表觀遺傳調控的原理和作用？
3樓：匿名使用者
組蛋白的磷酸化一般導致對應區域基因表達的上調。 表觀遺傳調控包括dna甲基化，組蛋白修飾（磷酸化，乙醯化，甲基化等）和小rna調節，是在dna序列的基礎上對基因表達的調節，是細胞分化的本質。如果除去表觀遺傳調控，人體各個細胞應該是一樣的，但是組蛋白修飾在dna複製過程中不但可以被複製，也可以在相應蛋白（如組蛋白乙醯化酶）的作用下改變修飾方式，導致各種細胞基因表達的差異。
具體原理就是不同的修飾方式改變了染色小體的構象，進而調節了轉錄因子和dna的相互作用，小rna調節則通過改變mrna和核醣體的相互作用從而達到其調節基因表達的作用。
4樓：匿名使用者
我學的是英文的，不太會翻譯。。。
不過在網上找了個，希望能回答你
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