1樓：
1.tbs和pbs的緩衝體系不同，tbs用tris做緩衝，pbs用磷酸鹽做緩衝。實際使用中差別不大。
tween-20是一種去汙劑，可以降低非特異結合帶來的背景。你上面提到的tbs+0.1% tween-20+5%脫脂奶粉，其中的tbs完全可以被pbs代替。
脫脂奶粉也可以用bsa代替，不過脫脂奶粉要便宜許多。
不知道你說的「做了幾次都沒結果」是怎麼樣沒結果，膜都是黑的，還是都是白的？這是兩種完全不同的「沒結果」。如果膜是黑的，說明背景太強，加入tween可能會改善一些。
如果膜是白的，那和pbs或者tbs關係不大，說明你實驗中有些關鍵試劑或步驟有問題，比如抗體或者轉膜過程，你需要乙個乙個去核實。
2. 網上tbs配方很多，自己搜一下吧，效果不會差太多。
2樓：這_五年
我以前就是按照cst的要求做的，但其實pbs和tbs沒什麼區別，反而pbs比tbs好呢
好幾次沒有結果，從最根本的開始找原因
蛋白量，上樣量夠不夠？ 分子量多少？ 一抗撫育時間，濃度等....
很多東西都可以改善，可你把焦點放在無關緊要的地方上了。
請教一下各位western blot孵完一抗忘了清洗就直接孵二抗會有什麼後果？謝謝啦
3樓：匿名使用者
相當於延長了孵育一抗的時間，一部分二抗被多餘的一抗結合浪費，版由於未清洗一抗權並未結合在膜上在二抗孵育清洗時也會洗掉，但是很可能會使你應該與二抗結合的一抗接觸不到二抗或不均勻，造成條帶不清異常，還有較強的非特異背景
western blot 一抗孵育4小時有影響嗎
4樓：匿名使用者
western blot 一抗孵育4小時當然有影響的，一抗孵育時間太長容易導致非特異性吸附加深
一般可以室溫孵育三十分，然後四度過夜。或者選擇室溫孵育2小時直接二抗。因為洗膜洗去的是未結合的抗體，抗體結合上就不容易洗掉了。
洗膜不完全背景會深，但洗膜時間延長並不能完全去除背景。
westernblot結果不好，可以把一抗洗脫下來後再2次孵育嗎？
5樓：旭嫻曉
western blot 一抗孵育4小時當然有影響的，一抗孵育時間太長容易導致非特異性吸附加深
一般可以室溫孵育三十分，然後四度過夜。或者選擇室溫孵育2小時直接二抗。因為洗膜洗去的是未結合的抗體，抗體結合上就不容易洗掉了。
洗膜不完全背景會深，但洗膜時間延長並不能完全去除背景。
western blot 為什麼要用二抗?直接標記一抗不行嗎？
6樓：螞蟻
之所以用二抗，是因為二抗是帶有酶標的抗體，它跟一抗結合之後可以**顯影。如果你的一抗上面直接帶有酶標物，那可以不用二抗直接**。但是一般你的一抗都是少數應用的，廠家不會大批量生產，就不會費勁給它加酶標。
7樓：匿名使用者
一方面是為了顯影啥的 主要還是是為了增強特異性 放大訊號
請教電腦問題，請教一電腦問題！！！
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