1樓：匿名使用者
螢光定量pcr檢測的是樣本中核酸含量，ct值反映的是樣本中的核酸含量的濃度。
1. 檢測樣本ct值小於等於30.0，且曲線有明顯的指數增長期，測定結果有效，可直接報告樣本陽性；
2. 檢測樣本ct值大於30.0且小於40時，重複一次，如果ct值仍小於40，且曲線有明顯的指數增長期，可報告樣本陽性，否則報告樣本陰性。
3. 檢測不到樣本ct值或ct值為40，報告樣本陰性。
以上是判斷樣本陽性或陰性的標準。
例如，你去醫院檢測自己是否患有B肝。那麼醫生會抽取你的血液作為標本。首先要對你的血液樣本進行處理，提取其中的核酸進行定量螢光pcr實驗。
如果你患有B肝即血液當中存在B肝病毒，你的血液樣本中的B肝核酸得到擴增，將會被pcr儀器檢測到，ct值則小於30，由此可以斷定你患有B肝。
如果你的檢測結果，ct沒有出現或者大於40，則說明B肝病毒在你的體內不存在。ct愈大說明樣本中病毒核酸的濃度愈低，大於40就失去了意義。
根據你的檢測報告，你檢測的專案的ct屬於無限大的情況。說明你檢測的專案是陰性，你的體內沒有這中病毒或細菌。
2樓：匿名使用者
你檢測的什麼專案啊？ ct值大於等於40表明 沒有p出你檢測的病毒 無抗體存在。 說的再通俗些就是 沒有檢測出你要檢測出的病毒
3樓：匿名使用者
就是說ct值沒有超標
螢光定量pcr檢測時的ct值怎麼確定的
4樓：為青生物
找個教程看看。
先設定基線，機器會自動設定，這個一般不用改。
然後設定閾值，閾值設定的不同，ct值會相差比較大
請問：做螢光定量pcr時，△△ct值是什麼意思，它的計算公式是什麼？ 20
5樓：禾鳥
△△ct是螢光定量計算公式的簡化形式，用於比較不同樣品之間的差別或變化比率。
ct=-1/lg(1+ex)*lgx₀+lgn/lg(1+ex)，其中，n為擴增反應的迴圈次數，x₀為初始模板量，ex為擴增效率，n為螢光擴增訊號達到閾值強度時擴增產物的量。△ct(n)=ct（目的基因）-ct（內參基因）；△△ct(n)=△ct(n)-△ct(1)。
起始拷貝數越多，ct值越小。利用已知起始拷貝數的標準品可作出標準曲線，其中橫座標代表起始拷貝數的對數，縱座標代ct值。因此，只要獲得未知樣品的ct值，即可從標準曲線上計算出該樣品的起始拷貝數。
擴充套件資料
螢光定量pcr的原理：
螢光定量pcr技術：在pcr反應體系中加入螢光基團，通過螢光訊號不斷累積而實現實時監測pcr全程，然後通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。在實時螢光定量pcr中，對全程pcr擴增過程進行實時檢測，根據反應時間和螢光訊號的變化可以繪製成一條曲線。
實時螢光定量常用的螢光化學分類有sybr green i法和tag man探針法。
ct值：c代表cycle，t代表threshold，ct值的含義是每個反應管內的螢光訊號到達設定的域值時所經歷的迴圈數。
6樓：一生乙個乖雨飛
△△ct這是相對螢光定量的乙個計算公式的簡化形式，用於比較不同樣品之間的差別或變化比率。
ct= -k lgx0+ b（線性方程）用這個方程可以通過ct值算出樣品的起始濃度
斜率=-1/lg(1+e)
擴增效率e=1, 斜率=-3.32
擴增效率範圍：90%-110%
斜率範圍：-3.1和-3.59之間
例如，想看a基因和b基因在某細胞系中表達量的差別，選取18s作為內參基因，就用a基因的ct值減去18s的ct值，得到△ct1，用b基因的ct值減去18s的ct值得到△ct2，然後用△ct1-△ct2=△△ct，而a，b基因的表達量差別為2（-δδct）次方。
當然這計算方法是基於螢光定量的數學計算模型簡化來的，平時使用沒什麼問題，如果兩個目的基因的擴增效率不一樣，這個計算方法是不能用的。
7樓：匿名使用者
ct= -k lgx0+ b（線性方程）用這個方程可以通過ct值算出樣品的起始濃度
斜率=-1/lg(1+e)
擴增效率e=1, 斜率=-3.32
擴增效率範圍：90%-110%
斜率範圍：-3.1和-3.59之間
△△ct這是相對螢光定量的乙個計算公式的簡化形式，用於比較不同樣品之間的差別或變化比率
例如，想看a基因和b基因在某細胞系中表達量的差別，選取18s作為內參基因，就用a基因的ct值減去18s的ct值，得到△ct1，用b基因的ct值減去18s的ct值得到△ct2，然後用△ct1-△ct2=△△ct，而a，b基因的表達量差別為2（-δδct）次方，當然這中計算方法是基於螢光定量的數學計算模型簡化來的，平時隨便用用沒什麼問題，如果你的兩個目的基因的擴增效率不一樣，這個計算方法是不能用的。
8樓：匿名使用者
我這邊有關於△△ct法的相關文獻以及推導公式，方便的話可以給我留一下你的郵箱
螢光定量pcr檢測支原體dna的ct值多少才是正常
9樓：南京金益柏生物科技****
解脲支原體正常的標準是小於500copies，如果大於了500，多認為是有解脲支原體感染，感染後可以無症狀，也可以出現了尿頻、尿急、尿痛和尿道分泌物增多，形成了尿道炎。
求助關於螢光定量pcr的ct值問題
10樓：林顧姝
如果有標準曲線，按照標準曲線計算。
一般都是相對量。則用delta delta ct方法來計算。舉例如下：
對照組基因a的ct值為20， 內參（比如βactin)ct值15。實驗組基因a ct值18，內參ct值14。
首先算加樣量：delta ct=15-14=1。2的1次方是2。也就是說實驗組的加樣量是對照組的2倍。
基因a: delta ct=20-18=2。2的2次方是4。也就是說基因a的量在實驗組是對照組的4倍。但是由於加樣量是2倍，所以4處以2=2，最後的相對量是2倍。
幾點注意：
1。必須確定擴增的特異性
2。 只有相同目標的ct值才能相減（擴增效率有可能不同）
3。 2的某次方只是理論值，實際擴增效率低於2。
4。 最好不用syber green
11樓：琦桂花富羅
看了你空間裡的溶解曲線，你可以看到溶解峰的溫度都很低，全在80以下，你擴出來的東西多半只是引物，你跑定量的時候有做ntc的孔嗎，如果有做，可以對照ntc組和加了模板的組，溶解峰還是一樣的話，那你擴出來的產物100%是引物了。
再有，你的擴增曲線問題，ct太了，一般做定量認為ct=25時，是乙個模板擴出來的，所以當大於25擴出來的結果都不可信。
還有，你反轉錄的時候rna加多少，2微克？，反轉錄體系是多少,20微公升？反轉錄之後按照多少比例稀釋，1比4？
總之，問題可以再問詳細一點，也可以直接hi我
如果做過ntc那溶解峰就沒問題了，而且都很單一，特異性蠻好的。沒稀釋的cdna做的定量，ct大於30？你p的什麼基因呢，表達量也太低了吧，內參的ct呢，也是這麼低嗎
螢光定量pcr的結果（ct值）怎麼分析
12樓：匿名使用者
目的基因螢光達到閾值時的迴圈數～ct值越低代表起始模板數量越大～
求助螢光定量pcr，我的實驗組和對照組的目的基因ct值非常相近，但是兩組內參基因的ct值相差5左右，正常嗎
13樓：匿名使用者
肯定不行的。螢光定量pcr通過以內參基因作為標準進行相對定量，即眾所e68a8462616964757a686964616f31333330363736周知的2–δδct 法，（前提是要求在所有測試樣本中恆定表達的已知參照基因，而且表達水平不受研究條件及處理方式的影響）。如果實驗組和對照組的目的基因ct值非常接近（前提是cdna稀釋的倍數一致）， 說明二者的目的基因無明顯變化呀。
4.2.3.1 2–δδct (livak) 方法
進行相對基因表達分析普遍採用操作簡便的2–δδct 法，條件是目標基因和參照基
因擴增效率都接近100% 且相互間效率偏差在5% 以內。使用2–δδct 法之前，必須驗
證目標基因和參照基因的擴增效率。
一旦確定目標基因和參照基因有相似且接近100% 的擴增效率，你就可以確定不
同樣本中目標基因表達水平的相對差異，步驟如下：
首先，對所有的測試樣和校準樣本，用內參基因的ct 值歸一目標基因的ct 值：
δct(test) = ct(target, test) – ct(ref, test)
δct(calibrator) = ct(target, calibrator) – ct(ref, calibrator)
其次，用校準樣本的δct 值歸一試驗樣本的δct 值：
δδct = δct(test) – δct(calibrator)
最後，計算表達水平比率：
2–δδct = 表達量的比值
得到的結果是通過參照基因表達水平校準的試驗樣本中目標基因相對於校準樣本
的增加或減少的倍數，用參照基因校準目標基因表達的目的是彌補樣本組織量的差異。
如果目標和內參基因的擴增效率不相近，可以優化或重新設計實驗，或者可以
採用4.2.3.3 節中闡述的pfaffl 法。另外，如果目標基因和參照基因有同樣的擴增效
率，但是擴增效率不等於2，那麼，2–δδct 法的公式可以修正為用實際擴增效率值代
替等式中的2。例如，如果目標基因和參照基因的擴增效率都為1.95，計算公式為
1.95–δδct。
下邊的假定的例子告訴你如何使用2-δδct 法來決定乙個目標基因（p53）在腫瘤
和正常卵巢組織的表達的相對水平。
例子：正常和腫瘤組織50ngrna 得到的cdna 用來分析p53(目標基因)和
gapdh（參照基因）。gapdh 用來作為參照是因為以前的研究表明這個基因在正常
和腫瘤組織中沒有差異。
樣品ct p53 (目標基因) ct gapdh (參照基因)
正常(校準樣本) 15.0 16.5
腫瘤(試驗樣本) 12.0 15.9
為了用上面介紹的方法進行相對定量分析，在檢測和校準的樣品中靶基因的ct
值和內參的ct 值進行歸一化：
δct(正常) = 15.0 – 16.5 = –1.5
δct（腫瘤）= 12.0 – 15.9 = –3.9
然後，試驗樣本的與校準樣本的δct 值進行歸一化
δδct = δct（腫瘤)– δct（正常）
= –3.9 – (–1.5) = –2.4
最後，計算表達比率：
2–δδct = 2–(–2.4) = 5.3
因此，腫瘤細胞的p53 表達水平比正常細胞高5.3 倍
希望能幫上你。
14樓：匿名使用者
你的實驗組和度招租的模板濃度不一樣吧，那樣內參基因的ct值肯定是不一樣的！
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