1樓：融樂翠祖
因為限制性內切酶的識別位點是固定的，所以我們可以在質粒和目的基因上人為的引入同樣的序列，這樣就能保證他們可以被同種酶切斷了。
一般的情況是，保持質粒不動，看質粒上都有哪些酶切位點，再在擴增基因時，在pcr引物上加上該酶的酶切位點，這樣擴增出來的基因就可以被相應的酶切割了。也有改造質粒的，不常見，多應用於特殊實驗需要。
2樓：大俠劍指天
肯定會有接反。
只要兩個粘性末端一樣，就會有接反的。但是沒有關係，我們只要有接正的就可以實驗，就會有結果。
如果不想接反，有兩個辦法。
第一，你可以把讀取用的啟動子直接轉殖在插入基因上，不管接正接反都可以讀取。
第二，你可以使用兩種不同的酶來切，前段和後端是不同的。就不會出現接反的問題了。
3樓：匿名使用者
單酶切是會接反的。所以一般做表達的話都使用雙酶切。
如果純粹用於序列分析（一般用t載體），連正連反就無所謂了。
如果單酶切接反了（50%概率），可以進行挑選，最簡單的方法是pcr驗證，即用引物上提供的一條正向引物，加上連入序列上的一條反向引物對質粒進行pcr，如果能擴增出來，那基本證明是連對了的。
4樓：匿名使用者
有可能會接反哦~加入的目的基因不止乙個哦~有很多很多，我只需要找出沒接反的就可以咯~
質粒的位點上有的酶切位點，一般重組質粒需要兩個酶，所以你要選擇兩個酶切位點，注意盡量避免使用切出平末端的酶。這樣就不會接反了哦~
為什麼切割質粒和目的基因要產生粘性末端而不是平末端
5樓：水靈風清
兩個粘性末端可以互補配對，有利於缺口的結合，如果平末端還要在兩端各加一些互補的序列才能接起來
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