SDS聚丙烯醯胺凝膠電泳中為什麼濃縮膠會被壓縮成層？如何調節凝膠的孔徑

1樓：詩冷雁印煙

我想樓主是不是想問濃縮膠的濃縮原理？

不連續系統的凝膠包括濃縮膠和分離膠。濃縮膠的孔徑大，分離膠的孔徑小。在電場的作用下，蛋白質顆粒在大孔膠中泳動時遇到的阻力小，移動快。

而在小孔膠中泳動時遇到的阻力大，移動慢。因此，在兩層凝膠的交界處，由於凝膠孔徑的不連續性使樣品遷移受阻而壓縮成很窄的區帶。同時，由於在兩層凝膠中均有tris和hcl。

tris的作用是維持溶液的電中性及ph。hcl在一定ph條件下易解離出cl-

，它在電場中遷移率大，走在最前面，故稱為快離子或前導離子。電極緩衝液中的甘氨酸在ph8.3的緩衝液中解離度很小，僅為0.

1-1%，因而在電場中遷移率很小，稱為慢離子或尾隨離子。大多數蛋白質在ph8.3或6.

7時均帶負電荷，在電場中均移向正極，其有效遷移率介於快慢離子之間，於是蛋白質就在快慢離子間形成的介面處，被濃縮成極窄的區帶。就達到了壓縮效果。

如果想調節凝膠的孔徑，只要改變凝膠的濃度就可以了，一般情況下，濃縮膠中丙烯醯胺-甲叉丙烯醯胺的濃度在3%-5%，我的經驗是，垂直槽跑蛋白，小於3%的，濃縮膠就非常脆弱了，大於5%的，膠就相對脆硬了，最適合的濃度需要經過自己的實驗進行嘗試。

2樓：俟從陽疏深

加一層水稱為水封

目的是隔絕空氣使催化反應快速進行，進而形成凝膠，還可使分離膠上沿平直。

並且加水後，保持分離膠表面的平整性，使濃縮膠和分離膠都處於同一水平面上。

甘氨酸是為了解離出甘氨酸根離子，甘氨酸根離子可以穩定的介面，使蛋白聚集在移動介面附近，濃縮在一起。

樣品液煮沸這個問題我個人認為是可以商榷的，因為理論上煮沸可以使sds和蛋白更快更好的結合，以便於sds-page的進行。但是有些蛋白似乎不煮沸直接上樣結果更好。對於非還原loading

buffer（即不含巰基乙醇）的樣品，一般是不要煮沸的。

長時間的電泳會使正極變酸，負極變鹼。

sds-聚丙烯醯胺凝膠電泳分離血清蛋白質的實驗中，當分離膠加完之後為什麼需要在上面加一層水？

3樓：匿名使用者

加一層水稱為水封

目的是隔絕空氣使催化反應快速進行，進

而形成凝膠，還可使分離膠上版沿平直。

並且權加水後，保持分離膠表面的平整性，使濃縮膠和分離膠都處於同一水平面上。

甘氨酸是為了解離出甘氨酸根離子，甘氨酸根離子可以穩定的介面，使蛋白聚集在移動介面附近，濃縮在一起。

樣品液煮沸這個問題我個人認為是可以商榷的，因為理論上煮沸可以使sds和蛋白更快更好的結合，以便於sds-page的進行。但是有些蛋白似乎不煮沸直接上樣結果更好。對於非還原loading buffer（即不含巰基乙醇）的樣品，一般是不要煮沸的。

長時間的電泳會使正極變酸，負極變鹼。

sds-聚丙烯醯胺凝膠電泳與聚丙烯醯胺凝膠電泳原理上有何不同？

4樓：諾諾百科

最大的不同是聚丙烯醯胺凝膠電泳（page）用的蛋白質不做任何變性處理。

sds-page中的sds是十二烷基磺酸鈉，是蛋白質變性劑，sds能拆散蛋白質的摺疊結構，然後沿伸展的多肽鏈的表面吸附。使肽鏈帶淨負電荷，蛋白質在電場中的泳動速度僅與蛋白質顆粒大小有關。

聚丙烯醯氨（page）凝膠電泳用於蛋白質與寡糖核苷酸的分離。電泳的驅動力靠與蛋白質結合的sds上所攜帶的負電荷。蛋白質電泳（一般指sds-page）根據蛋白分子量亞基的不同而分離蛋白。

蛋白質亞基的電泳遷移率主要取決於亞基分子量的大小，電荷因素可以忽視。