1樓：飛雨過江來
一、原理
磷脂醯絲氨酸（phosphatidylserine，ps）正常位於細胞膜的內側，但在細胞凋亡的早期，ps可從細胞膜的內側翻轉到細胞膜的表面，暴露在細胞外環境中。annexin v 是一種分子量為35~36kd 的ca2+依賴性磷脂結合蛋白，能與ps 高親和力特異性結合。將annexin v 進行螢光素（fitc、pe）或biotin 標記，以標記了的annexin v 作為螢光探針，利用流式細胞儀或螢光顯微鏡可檢測細胞凋亡的發生。
碘化丙啶（propidine iodide，pi）是一種核酸染料，它不能透過完整的細胞膜，但在凋亡中晚期的細胞和死細胞，pi 能夠透過細胞膜而使細胞核紅染。因此將annexin v 與pi 匹配使用，就可以將凋亡早晚期的細胞以及死細胞區分開來。
二、方法
1、調整待檢測細胞濃度為106個/ml，取200ul， 1000rpm×5min(4℃)。
2、預冷的pbs1ml 潤洗兩次2，1000rpm×5min(4℃)。
3、將細胞重懸於100ul binding buffer，加入2ulannexin-v-fitc(20ug/ml)，輕輕混勻，避光冰上放置15分鐘。
4、轉至流式檢測管，加入400ulpbs，每個樣品臨上機前加入1ulpi（50ug/ml），2分鐘後迅速檢測。
5、同時以不加annexin v-fitc 及pi 的一管作為陰性對照。
三、注意事項
1、整個操作動作要盡量輕柔，勿用力吹打細胞。
2、操作時注意避光，反應完畢後盡快在一小時內檢測
四、結果判定
以annexinv為橫軸，pi為縱軸；
左上象限為機械性損傷細胞；
右上為晚期凋亡細胞或者壞死細胞；
左下為陰性正常細胞；
右下為早期凋亡細胞。
2樓：匿名使用者
記得陰性對照，陽性對照，還有調節通道
流式annexin-fitc /pi 雙染法測凋亡，各個象限代表什麼狀態的細胞
流式細胞儀 fitc-pi雙染hek293t細胞 空白組細胞凋亡率很高
3樓：匿名使用者
做這個實驗，有幾個要求：
第一，貼壁培養的細胞要處理的非常輕柔專，不然會導致大量假陽屬性（annexin v 陽性）。這個方法最好是由於懸浮培養的，比如淋巴細胞
第二，從圖上看，你的電壓設定的過低，第乙個圖陰性無染色的細胞都被壓倒一起，而不是位於左下象限的中間。另外，你的陽性對照的細胞，用的是已知確定凋亡死亡的細胞嗎？pi的染色看起來很弱
第三，annexin v單染沒有強陽性，而且這個細胞群都有右移，這個提示很可能是你處理細胞過頭導致的假陽性。
第四，你沒有貼fsc-ssc的圖。真有凋亡發生，那個圖也會有變化的。
第五，你的單染對照因為設定的電壓過低，沒有做對雙色補償，所以你這個實驗資料時無效的。
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