1樓:匿名使用者
常規的使用小提試劑盒提取得到的質粒,並不適合用來轉染細胞,其原因在於:
1.小提質粒濃度較低,一般僅為0.1~0.2ug/ul。而用質粒轉染細胞,一般至少需要2~5ug左右,如果使用小提質粒,只能加大上樣量,這樣對轉染操作會有一定影響。
2.小提質粒純度不夠,且內毒素含量較高,會對目的細胞有一定毒性,影響轉染效率。
基於以上原因,如果提取的質粒在用質粒轉染目的細胞時,可以選擇長沙贏潤生物技術****的質粒大量提取試劑盒。
2樓:匿名使用者
建議使用博凌科為的 質粒提取試劑盒,目前好評較多
質粒提取試劑盒採用鹼裂解法裂解細菌,用中和方法將基因組dna和蛋白質沉澱除去,在高鹽低ph條件下質粒dna選擇性地結合到矽膠膜上,經漂洗液w1、漂洗液w2洗滌清除殘留在矽膠膜上的雜質和高濃度鹽離子,最後用洗脫緩衝液eb 將質粒dna洗脫下來。試劑盒整個純化過程僅需20~30分鐘,不涉及毒性有機溶劑的使用,也無需乙醇沉澱。一般提取量在15-20μg。
得到的質粒dna純度高,od值在1.7-1.9之間,純化的質粒dna適合用作測序、酶修飾、體外轉錄與翻譯、細菌轉化等分子生物學實驗。
轉染用質粒提取試劑盒
3樓:匿名使用者
大提質粒和小提質粒的基本原理是一樣的,都是通過一定的方法(如加鹼裂解)使在細菌內大量擴增的質粒釋放出來,然後經過去蛋白去rna等一系列步驟純化dna,最終將dna提取出來。區別:
1.大提用於大量菌液的提取,100ml-500ml 均可,而小提用的菌液量很少,一般1.5-5ml。
2.一般試劑盒中大提比小提多了溶菌酶、異丙醇(**沉澱核酸)、含一定量peg的氯化物(**質粒dna)及乙酸銨等,其作用及目的都是有利於細菌的裂解和質粒的純化,所以大提的產物比小提的量多很多,而且純度很高。
3.小提一般用於質粒鑑定和對純度要求不是很高的實驗,大提用於質粒的大量提取和轉染等純度要求很高的實驗。
質粒提取試劑盒溶液1中rna酶的濃度是多少
4樓:匿名使用者
rnase指需要加在solution 1裡面,就是懸浮菌液的那種液體.裂解液2和酸性溶液3不用加. 不同的盒子加的量多少是不一樣的,其實多加點少加點關係也不大.
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