1樓：百度文庫精選
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細胞轉染實驗1．實驗目的
學習和掌握外源基因匯入真核細胞的主要方法—脂質體介導的轉染。瞭解外源基因進入的一般性方法，觀測外源蛋白的表達（綠色熒光蛋白），為染色準備實驗材料。
2．實驗原理
transfect
上圖所示是脂質體介導轉染的示意圖，它顯示了外源質粒進入細胞的一般過程。外源基因進入細胞主要有四種方法：電擊法、磷酸鈣法和脂質體介導法和病毒介導法。
電擊法是在細胞上短時間暫時性的穿孔讓外源質粒進入；磷酸鈣法和脂質體法是利用不同的載體物質攜帶質粒通過直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因進入細胞；病毒法是利用包裝了外源基因的病毒感染細胞的方法使得其進入細胞。但是由於電擊法和磷酸鈣法的實驗條件控制較嚴、難度較大；病毒法的前期準備較複雜、
而且可能對於細胞有較大影響；所以現在對於很多普通細胞系，一般的瞬時轉染方法多采用脂質體法。利用脂質體轉染法最重要的就是防止其毒性，因此脂質體與質粒的比例，細胞密度以及轉染的時間長短和培養基中血清的含量都是影響轉染效率的重要問題，通過實驗摸索的合適轉染條件對於效率的提高有巨大的作用。
上圖是本次實驗採用的脂質體中陽離子組分的結構的示意圖。本次實驗採用的脂質體是promega公司的transfast脂質體試劑，它是一種陽離子脂質體和中性脂質體的混合物，是對於本次實驗中採用的293t細胞優化的轉染試劑。
3.實驗材料與器材1）材料293t細胞myod表達質粒和egfp表達質粒d
2樓：
血清的存在會干擾sirna與轉染試劑的混合，從而影響轉染效率。建議用來稀釋sirna和稀釋轉染試劑的培養基是無血清培養基。我們實驗室前段剛用rfect，sirna方法做完a549細胞，細胞的鋪板密度在45%左右，用的24孔板，每孔2ul試劑，設定的sirna終濃度10nm,30nm,50nm,100nm四個梯度，每個梯度做了2個復孔，方便比較
293t細胞為什麼經常用於轉染、蛋白質表達？
如何確定293t細胞轉染效率
3樓：
如果293t本身不表達這個蛋白的話，最大的可能是一抗質量不過關
你可以做一下免疫印跡看看。免疫組化假陽性多正常（非特異性吸附）。
免疫印跡western blotting用分子量大小來判斷，很難出假的。
293t細胞是什麼細胞
4樓：海之藍純
293t細胞是轉染腺
bai病毒e1a基因的人腎du上皮細zhi胞dao系，293t細胞由293細胞派生，同時表達內sv40大t抗原，含有sv40複製起始
容點與啟動子區的質粒可以複製。用ca3(po4)2轉染效率可高達50%。蛋白表達水平高，轉染後2-3天用鹼性磷酸酶分析可較容易地檢測到表達的蛋白。
瞬時轉染293t細胞是過表達蛋白並獲得細胞內及細胞外(分泌的或膜)蛋白的便捷方式。
吞噬細胞。t細胞。效應t細胞。b細胞。效應b細胞哪些可以識別特異性抗原，為什麼
仉令秋柴會 t細胞。效應t細胞。b細胞 能特異性識別抗原,效應b細胞只能分泌特定的抗體,不具有特異性識別功能,因為特異性識別早由b細胞進行完成,然後再分化出效應b細胞來產生特定抗體。吞噬細胞具有識別抗原的功能，但只是能識別是不是抗原，而不能識別出是什麼種類的抗原，所以也就不具備特異性識別功能。 賓幻...
T細胞與B細胞的活化過程，T細胞和B細胞活化的雙訊號分別是什麼
在抗原衝破人體前兩道防線後進入人體，巨噬細胞吞噬抗原然後表面形成抗原決定簇，t細胞與該抗原決定簇結合釋放淋巴因子，刺激b細胞 分化，這樣b細胞就被活化了 試述免疫應答過程中t細胞和b細胞對抗原識別及活化過程的區別 免疫應答是指機體免疫系統對抗原刺激所產生的以排除抗原為目的的生內理過程。這個過程是容免...
t細胞的分類方法有哪些，T細胞的分類方法有哪些
s向隅姑娘 t細胞的分類方法尚未統一。t細胞是相當複雜的不均一體 又不斷在體內更新 在同一時間可以存在不同發育階段或功能的亞群，但分類原則和命名比較混亂，尚未統一。按免疫應答中的功能不同，可將t細胞分成若干亞群，一致公認的有 1 輔助性t細胞 helper t cells,th 具有協助體液免疫和細...