1樓：匿名使用者
得到的rna反轉錄成cdna，將cdna的完整orf區連線到表達載體上，記得連線上起始因子。然後匯入一般是bl21），就可以獲得蛋白了。
2樓：匿名使用者
逆轉錄，得到cdna，然後pcr得到序列，連線到表達載體中，轉化到， 根據載體進行誘導表達，得到表達產物。
3樓：巨蟹井井
親。現在才問。早點就好啦。
4樓：小之慕
你是濰坊醫學院的？
大腸桿菌（e.coin）生產胰島素的過程及原理（醫學生化專業問題）
5樓：知道也不能說
生物制法：首先剪下胰島素基因，再將胰島素基因轉入人的大腸桿菌內，再創造大腸桿菌裂殖的有利環境，對大腸桿菌進行大規模培養，使之產生大量的**糖尿病的藥物——胰島素。
基因制法： 在基因工程人胰島素的生產過程中，一般是先表達胰島素原，然後對胰島素原復性，復性後的胰島素原通過酶切得到有活性的胰島素。其中胰島素原的復性效率是決定最終收率的關鍵因素，正確摺疊與錯誤折益胰島素原的分子量完全相同，結構非常相似，採用rt-hplc可對其進行分離檢定。
sergeev等利用反相色譜建立了復性液中胰島素原的檢測方法。如果要對正確摺疊與錯誤折盛胰島素原的結構進一步說明，可將其用蛋白酶v8酶解，然後用rp-hplc-ms作膚圖譜。damn等用 protease v8酶解胰島素原，然後用r'fhplc做肚譜圖，並結合質譜法對重組胰島素原的折受過程進行了監測。
6樓：茅玉枝稅子
因為大腸桿菌是原核生物，是單細胞生物，所以用大腸桿菌生產胰島素時，只用了基因工程、發酵工程和酶工程。
用到基因工程，是用了基因重組技術，即把人類的控制胰島素合成的基因用化學方法切割下來，再植入到大腸桿菌的dna中，形成乙個重組dna分子，利用大腸桿菌的繁殖和生長，在大腸桿菌細胞體內合成出人胰島素。
既然是利用細菌生產藥物，肯定要用到發酵工程，不然如不讓大腸桿菌大量繁殖，就得不到工業產量的藥品。
在切割以及重組dna時，必須用到一系列酶，所以需要用到酶工程。
rna的提取方法步驟及原理.
7樓：充初夏侯
總rna的抽提方法：
目前常用的方法是用異硫氰酸胍苯酚抽提法。
trizol試劑是使用最廣泛的抽提rna專用試劑，主要由苯酚和異硫氰酸胍組成，可以迅速破壞細胞結構，使存在於細胞質及核內的rna釋放出來，並使核醣體蛋白與rna分子分離，還能保證rna的完整。
提取步驟：先用液氮研磨材料，勻漿，加入trizol試劑，進一步破碎細胞並溶解細胞成分。然後加入氯仿抽提，離心，分離水相和有機相，收集含有rna的水相，通過異丙醇沉澱，獲得比較純的總rna,用於下一步mrna的純化。也可將含有rna樣品的細胞破碎液通過矽膠膜純化柱純化。
rna濃度和純度判斷：
od260為1時相當於濃度為50 ug/ml;
od260/0d280值在 之間，表示純度較好；
0d260/od280值低於，樣品有蛋白質或酚汙染；
0d260/0d280值大於，提取的rna可能有降解；
電泳後如果rrna大小完整，而且28s rrna和18srrna亮度接近2:1、mrna分布均勻，則認為rna。
8樓：竺萌鹿德
去買生物公司的rna提取試劑盒，這樣比自己配試劑提取出來的要純淨的多，量也多，還方便。買了不同量的提取試劑盒後，上面會有操作步驟。
9樓：匿名使用者
國家實驗室的攻關課題？不至於吧，樓上的。我們大學實驗就有這個，提取酵母菌的rna。樓主去買本北大出的《生物化學實驗》，李健武著。裡邊有詳細的操作步驟。
先寫乙個隨手搜到的ppt
10樓：匿名使用者
先加rna抑制劑，然後冰上提取，操作盡量快。
這個公司，武漢勤致傑生物，我用了。根本提不出來，全降解了，付錢之前騙人說多好用，售後的時候態度超級差，毀我樣本，給我氣收。
11樓：網友
你要幹什麼。國家實驗室的攻關課題你想在網上下啊。沒有龐大的金錢和技術支援根本別想觸及著方面。
用大腸桿菌生產人的胰島素的詳細步驟
12樓：匿名使用者
大腸桿菌產生胰島素並進行批量生產的原理是運用到了現代生物技術的轉基因技術，它是先將人胰島素基因從人的染色體上分離出來，插入從細菌細胞中提取出來的質粒(一種小圓環狀dna)中，再將這個合併起來的、帶有胰島素基因的質粒，轉移入大腸桿菌的細胞中，隨後該胰島素基因會指導大腸桿菌細胞產生胰島素，人類即可將這些胰島素提取並收集出來，用於**糖尿病病人。
那麼如何利用大腸桿菌生產胰島素 呢？下面從基因工程角度說一下。
1.提取目的基因：
既從人的dna中提取胰島素基因，可使用限制性內切酶將目的基因從原dna中分離。
2.提取質粒：
使用細胞工程，培養大腸桿菌，從大腸桿菌的細胞質中提取質粒，質粒為環狀。
3.基因重組：
取出目的基因與質粒，先利用同種限制性內切酶將質粒切開，再使用dna連線酶將目的基因與質粒"縫合",形成乙個能表達出胰島素的dna質粒。
4.將質粒送回大腸桿菌：
再大腸桿菌的培養液中加入含有ca+的物質，如cacl2,這使細胞會吸收外源基因。此時將重組的質粒也放入培養液中，大腸桿菌便會將重組質粒吸收。
5.胰島素的產生：
再大腸桿菌內，質粒通過表達轉錄與翻譯後，便產生出胰島素蛋白質。通過大腸桿菌的大量繁衍，便可大量生產出胰島素！
13樓：匿名使用者
他們我覺得應該是要從cdna文庫中選取目的基因，因為人的基因中含有內含子和外顯子，但是大腸桿菌不能識別這個，所以說從人體內直接提取的dna，應該是不可以用來，直接產生胰島素的。
如圖是利用基因工程技術生產人胰島素的操作過程示意圖．據圖作答．（1）圖中細胞1是______細胞．過程②、
14樓：萩原琉璃
（1）據圖分析可知：①為從細胞中獲取胰島素mrna的過程，由於基因的選擇性表達，只有胰島b細胞能合成胰島素，故細胞1為胰島b細胞；過程②為以mrna為模板逆轉錄合成胰島素目的基因，需要逆轉錄酶，④為pcr技術大量擴增目的基因的過程，需要耐高溫的taq聚合酶．
2）過程②獲得的目的基因由胰島素的mrna逆轉錄而來，該mrna都能編碼氨基酸，與人細胞中胰島素基因相比，無不能編碼蛋白質的內含子序列．
3）若a中共有a個鹼基對，其中鳥嘌呤有b個，根據鹼基互補配對原則，g=c=b個，則a=t=a-b個，經③④⑤過程連續複製4次，共需要提供24-1=15條dna分子的原料即可，故至少提供胸腺嘧啶15（a-b）．
4）圖中b為運載體質粒，成分是環狀的dna，組成單位為4種脫氧核苷酸，基因工程的核心步驟是基因表達載體的構建，包括⑥剪下和⑦拼接兩個過程．
5）圖中c為基因表達載體（重組質粒），為了便於重組dna的鑑定和選擇，其上必須有標記基因；⑧為將目的基因匯入受體細胞大腸桿菌，常用ca2+ （cacl2）處理法．
6）⑨為工程菌的大量培養繁殖，得到使外源基因高效率表達的菌類細胞株系稱為工程菌；由於大腸桿菌是原核生物，無染色體變異和基因重組，若過程⑨發生了變異即為基因突變；過程⑩得到的人胰島素還需要體外加工才具有生物活性，因為大腸桿菌體內沒有內質網和高爾基體，不能對蛋白質加工．
故答案為：1）胰島b 逆轉錄酶、taq酶。
2）內含子。
3）15（a-b）
5）標記基因 ca2+ （cacl2）
6）工程菌 基因突變 沒有內質網和高爾基體，不能對蛋白質加工。
利用大腸桿菌生產胰島素的原理是
15樓：優秀
答案 b.將控制胰島素的基因轉入大腸桿菌，並大規模培養。因為大腸桿菌生產人的胰島素，是利用基因工程裡的轉基因技術，把人的胰島素基因轉入大腸桿菌中，通過轉錄，翻譯，從細胞內分泌出胰島素。
胰島素作用機理
16樓：匿名使用者
胰島素是機體內唯一降低血糖的激素，也是唯一同時促進糖原、脂肪、蛋白質合成的激素。作用機理屬於受體酪氨酸激酶機制。
一）調節糖代謝。
胰島素能促進全身組織對葡萄糖的攝取和利用，並抑制糖原的分解和糖原異生，因此，胰島素有降低血糖的作用。胰島素分泌過多時，血糖下降迅速，腦組織受影響最大，可出現驚厥、昏迷，甚至引起胰島素休克。相反，胰島素分泌不足或胰島素受體缺乏常導致血糖公升高；若超過腎糖閾，則糖從尿中排出，引起糖尿；同時由於血液成份中改變(含有過量的葡萄糖), 亦導致高血壓、冠心病和視網膜血管病等病變。
胰島素降血糖是多方面作用的結果：
1）促進肌肉、脂肪組織等處的靶細胞細胞膜載體將血液中的葡萄糖轉運入細胞。
2）通過共價修飾增強磷酸二酯酶活性、降低camp水平、公升高cgmp濃度，從而使糖原合成酶活性增加、磷酸化酶活性降低，加速糖原合成、抑制糖原分解。
3）通過啟用丙酮酸脫氫酶磷酸酶而使丙酮酸脫氫酶啟用，加速丙酮酸氧化為乙醯輔酶a，加快糖的有氧氧化。
4）通過抑制pep羧激酶的合成以及減少醣異生的原料，抑制醣異生。
5）抑制脂肪組織內的激素敏感性脂肪酶，減緩脂肪動員，使組織利用葡萄糖增加。
二）調節脂肪代謝。
胰島素能促進脂肪的合成與貯存，使血中游離脂肪酸減少，同時抑制脂肪的分解氧化。胰島素缺乏可造成脂肪代謝紊亂，脂肪貯存減少，分解加強，血脂公升高，久之可引起動脈硬化，進而導致心腦血管的嚴重疾患；與此同時，由於脂肪分解加強，生成大量酮體，出現酮症酸中毒。
三）調節蛋白質代謝。
胰島素一方面促進細胞對氨基酸的攝取和蛋白質的合成，一方面抑制蛋白質的分解，因而有利於生長。腺垂體生長激素的促蛋白質合成作用，必須有胰島素的存在才能表現出來。因此，對於生長來說，胰島素也是不可缺少的激素之一。
四）其它功能。
胰島素可促進鉀離子和鎂離子穿過細胞膜進入細胞內；可促進脫氧核糖核酸(dna)、核糖核酸(rna)及三磷酸腺苷(atp)的合成。
載體和質粒的區別，質粒載體和重組質粒的區別
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墨漪薊憐南 識別序列有區別 g gatcc 限制酶1,2都可以切，但是 gatc 只能有酶2切。懂了麼，就是說酶一要識別出6個鹼基這樣的排序才能切，但是酶二只需要識別出4個這樣的排序，酶二的選擇性比較低。然後，請給我題目裡的那張圖 是否在標記基因中存在gatc的序列呢，如果有，酶二會去把他切斷，所以...
能量是否必須以物質為載體，能量是否必須物質為載體？ 我自認為這個答案是肯定的。那麼就會出現另乙個問題 光能的載體是什麼？
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