1樓：匿名使用者
泡桐葉綠體和線粒體的提取與分離
一、試驗目的：
1、將泡桐葉片中的葉綠體和線粒體提取出來。
2、掌握植物葉片中葉綠體和線粒體提取與分離的基本技術。
3、學習蔗糖沉澱差速離心法和差速離心法提取線粒體的方法。
二、實驗材料與儀器：
實驗材料：泡桐新鮮葉片。
實驗試劑：蒸餾水；液氮；緩衝液a（50 mmo l/l tr is,，25 mmo l /l edta，1.25 mo l/l n ac l ，10 mmo l/lβ-巰基乙醇, ψ=0.
1% (w /v ) bsa (牛血清蛋白) , ψ= 2% (w /v) ctab, 10 g /l pvp, ph = 8. 0）；緩衝液b (tris2hcl 0.105 mol/ l, 蔗糖0.
15 mol/ l, edta 0.1005 mol/ l, bsa 0.11% , 巰基乙醇0.
11%, ph =7.15)；緩衝液c( tris2hcl 0.105 mol/ l, 蔗糖0.
13 mol/l, mgcl2 0.101 mol/ l, ph 7.15)；緩衝液d( 0.
2 mol/ l 蔗糖、0. 3mol/ l 甘露醇、50 mol/ l tris2cl、1 mol/ l edta、0. 1% bsa 、0.
6% pvp、0. 1% b2巰基乙醇,ph 7. 5)；緩衝液e( 蔗糖0.
3 mol/ l、50mol/ l t ris2cl, ph 7. 5)；緩衝液f( 50 mol/ ltris2cl、0. 3 mol/ l 甘露醇、0.
2 mol/ l 蔗糖、0. 1% bsa、0. 6% pvp, ph = 7.
5)；紗布等。 試驗儀器：研缽，研磨棒；離心管（250ml）；高速冷凍離心機；移液槍；高速組織搗碎器等
三、 試驗步驟： 1、葉綠體的提取與分離 (1) 稱取新鮮泡桐葉片50 ~ 100 g, , 暗處理12小時，蒸餾水洗乾淨在液氮中儲存3 h以上, 以最快速度磨成粉末, 然後用6層無菌紗布過濾, 收集濾液, 棄渣。 (2) 將濾液分裝到250ml預冷的離心管中, 4℃下200r/min 離心5m in, 小心移出上清液到另乙個新的預冷的離心管。
(3) 再在4℃ , 1500 r/min離心10m in, 小心抽去上清夜, 保留綠色沉澱顆粒, 避免光照(防止澱粉聚集)。 (4) 沉澱中加100ml緩衝液a ( 10mm o l/l巰基乙醇用前加入), 用無菌軟毛筆充分懸浮沉澱, 4℃ 下1500 r/min 離心6m in, 棄上清液。 (5) 沉澱中加30ml緩衝液c, 用無菌軟毛筆充分懸浮沉澱, 4℃ 下1500 r/min離心6m in, 棄上清, 沉澱為純化的葉綠體。
2、線粒體的提取與分離 2.1 蔗糖沉澱差速離心法。 （1） 稱取新鮮泡桐葉片50 g 左右, 預先暗處理，按3 ml/g 加入研磨緩衝液b (tris2hcl 0.
105 mol/ l, 蔗糖0.15 mol/ l, edta 0.1005 mol/ l, bsa 0.
11% , 巰基乙醇0.11%, ph =7.15) , 用預冷的高速組織搗碎器搗碎至糊狀, 尼龍紗布過濾, 收集濾液。
（2）濾液於1 200r/min, 4℃離心15 min。收集上清液後, 再於4℃ ,16 000 r/min離心20 min。加少量的預冷的懸浮緩衝液c( tris2hcl 0.
105 mol/ l, 蔗糖0.13 mol/l, mgcl2 0.101 mol/ l, ph 7.
15) , 用毛筆輕攪沉澱。 （3）補加懸浮緩衝液至1/ 5 體積, 4℃, 1 200 r/min離心15 min。取上清液至另一離心管, 16 000 r/min離心20 min, 用2 ml 懸浮緩衝液懸浮沉澱, 按25 lg/ g 鮮樣加入dnase i, 冰浴2 h 以去除核基因組dna。
加入edta#na2, 終濃度0.12 mol/ l, 終止反應。 （4）配製蔗糖梯度溶液, 按由高到低的順序將蔗糖溶液60% ( 330µl) , 52% ( 830µl) , 36%( 1 ml) , 20% ( 830µl) , 依次鋪入6 個5 ml 透明管中, 室溫放置1 h, 然後將2 ml 粗製線粒體懸浮液平均鋪於斜面上。
100 000r/min, 4℃水平離心50 min (beckman sw55) 。收集分層於36% ~ 52% 介面的線粒體, 置於冰上, 小心滴加4 倍體積的勻漿緩衝液( 未加巰基乙醇和bsa) , 混勻, 16 000r/min 4 ℃離心10 min, 沉澱即為純化的線粒體。 2.
2 高鹽差速離心法 （1）線粒體提取。稱取新鮮泡桐葉片50 g 左右, 預先暗處理左右, 加入3倍體積預冷的勻漿緩衝液d( 0. 2 mol/ l 蔗糖、0.
3mol/ l 甘露醇、50 mol/ l tris2cl、1 mol/ l edta、0. 1% bsa 、0. 6% pvp、0.
1%β-巰基乙醇,ph 7. 5) , 將預冷的組織用高速勻漿搗碎機破碎組織, 低速2 次, 每次5 s, 高速3 次, 每次8~ 10 s; 10min 後加入2 倍體積緩衝液e( 蔗糖0. 3 mol/ l、50mol/ l t ris2cl, ph 7.
5) , 靜置20 min, 經4 層紗布過濾, 分裝於8 個50 ml 無菌離心管中; 取濾液以3 000 r/ min 和4 000 r/ min 各離心10 min, 以除去組織碎片和質體; 將上清液轉入新的無菌離心管中,13 000 r / min 離心10 min, 棄上清, 得到粗線粒體沉澱; 在每管沉澱中加入緩衝液f( 50 mol/ ltris2cl、0. 3 mol/ l 甘露醇、0. 2 mol/ l 蔗糖、0.
1% bsa、0. 6% pvp, ph = 7. 5) , 用毛筆輕刷沉澱使之充分懸浮後收集至50 ml 無菌離心管內。
（2）線粒體純化。懸浮液4 000 r/ min 離心10min, 上清液轉入新的離心管中, 加入dnase 至終濃度25 lg/ g, 同時加入終濃度為0. 01 mol/ l 的mgcl2 , 冰上反應2 h。
在冰浴液中加入edta 至終濃度20 mol/ l, 終止dnase ñ 反應; 將此溶液小心置於20 ml 0. 6 mol/ l 蔗糖介質上( 0. 3 mol/ l甘露醇、50 mol/ l tr is2cl、0.
6 mol/ l 蔗糖,ph 7. 5) , 13 000 r/ min 離心10 min。棄上清, 沉澱中加入0.
1 ml/ g 的緩衝液c , 輕輕懸浮均勻, 再次將此溶液小心置於20 ml 0. 6 mol/ l 蔗糖介質上,13 000 r/ min 離心20 min, 所得沉澱即為純化的線粒體。
四、試驗需要注意的問題：
1、泡桐葉片需要新鮮的葉片。
2、試驗的儀器材料如研缽、離心管、蒸餾水等均需使用前滅菌。
3、在提取分離過程中操作所需要的溫度、環境要盡量滿足。
4、操作時要細心，造作技術要準確盡量減小操作誤差。
5、使用試驗儀器時注意安全。
葉綠體和線粒體能進行dna的轉錄和翻譯嗎？
2樓：再別康橋要留心
可以。這兩種細胞器中的dna都能轉錄和翻譯，因為這兩種細胞器中都有核醣體。
線粒體，葉綠體自身dna的複製，轉錄，翻譯是什麼意思？
3樓：曾經路過
線粒體和葉綠體含有少量的dna，所以會發生dna的複製。
dna轉錄形成rna，mrna翻譯形成蛋白質。概念和過程看課本吧，必修二。
4樓：匿名使用者
葉綠體線粒體的dna可以複製，也可以轉錄
5樓：我叫墨菲爾
就是自身表達自己的意思
線粒體和葉綠體中的dna的轉錄和翻譯是同時進行的麼，和細胞核中的轉錄有什麼區別？ 10
6樓：之何勿思
一.轉錄：
1、rna聚合酶：
原核生物的rna聚合酶是一種多聚體蛋白質（α2ββ'σ）；真核生物的rna聚合酶有三種（rna聚合酶ⅰ、ⅱ、ⅲ），分別轉錄不同種類的rna。
2、轉錄過程：
⑴原核生物的轉錄過程：轉錄全過程均需rna聚合酶催化。
①起始過程需核心酶，由σ亞基辨認起始點，被辨認的dna區段是-35區。在這一區段酶與模板的結合鬆弛，酶移向-10區並跨入轉錄起始點。
②延長過程的核苷酸聚合僅需核心酶催化。
③終止分依賴ρ因子的和不依賴ρ因子的轉錄終止。
a、依賴ρ因子的轉錄終止：結合後ρ因子和rna聚合酶都可發生構象變化，從而使rna聚合酶停頓，解螺旋酶的活性使dna/rna雜環雙鏈拆離，利於產物從轉錄複合物中釋放。
b、不依賴ρ因子的轉錄終止：dna模板上靠近終止出有些特殊鹼基序列，轉錄出rna後，rna產物形成特殊結構來終止轉錄。轉錄產物的3'-末端，常發現有多個連續的u。
連續的u區5'-端上游的一級結構可形成莖環或發卡形式的二級結構。
7樓：單純的我
線粒體和葉綠體是同時進行的，接下來的細胞核的是：沒有核膜的（原核細胞）也是同時進行的，有核膜的（真核細胞）不是同時進行的.謝謝採納
線粒體，葉綠體中的dna可以轉錄，翻譯嗎？可以的話翻譯出來的蛋白質有哪些？功能是什麼？有什麼作用？
8樓：匿名使用者
可以的，這些半自主細胞器中不僅有dna而且有蛋白質合成系統，並且合成蛋白的方式和核dna合成蛋白的方式一樣，包括轉錄和翻譯。研究表明，線粒體和葉綠體中的一些蛋白質是自身合成的（多是一些新陳代謝中用到的酶等）；一些是細胞基質中合成後轉入的；還有需要自身dna與核dna相互作用形成的。
其實這些也可以從半自主細胞器的進化來推想，關於線粒體葉綠體有一種說法是這些細胞器本身是一種功能單一的生物，後被內吞成為細胞器。那它們在被吞入前是需要獨立合成蛋白的，所以應該具有蛋白合成能力。進化方面了解不多，僅為己見,若感興趣可以自己查閱相關資料。
9樓：匿名使用者
可以轉錄翻譯。葉綠體和線粒體中的一部分蛋白質就是由自身dna翻譯的，功能是和呼吸作用和光合作用有關。
**粒體和葉綠體進行轉錄的場所是**？
10樓：受軒昂
線粒體和葉綠體的基質中。因為它們的dna存在於它們的基質中，所以轉錄也是在基質中。
（附：它們的翻譯過程也是在基質中進行。）
如有不懂歡迎追問 o(∩_∩)o
祝學業進步！
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