1樓：匿名使用者
這是最重要的一步。理想的，只同目的序列兩側的單一序列而非其它序列退火的primer要符合下面的 一些條件
1) 足夠長,18-24bp,以保證特異性.當然不是說越長越好,太長的primer同樣會降低特異性,並且降低產量
2) gc% 40%~60%
3) 5'端和中間序列要多gc,以增加穩定性
4) 避免3'端gc rich, 最後3個base不要有gc,或者最後5個有3個不要是gc (有人說：3' 端最好是 gc/cg/cc/gg。)
5) 避免3'端的互補, 否則容易造成dimer
6) 避免3'端的錯配
7) 避免內部形成二級結構
8) 附加序列(rt site, promoter sequence)加到5'端, 在算tm值時不算,但在檢測互補和二級結構是要加上它們
9) 使用兼併primer時, 要參考密碼子使用表,注意生物的偏好性,不要在3'端使用兼併primer,並使用 較高的primer濃度(1um-3um)
10) 最好學會使用一種design software. pp5,oligo6,dnastar, vector nti, online design et al.
2樓：
序列發給公司合的。。。。
引物是怎麼合成的?
3樓：匿名使用者
自己把引物序列設計好，（郵件）填表把它傳送到上海生工公司，他們會引物合成好，裝在ep管裡寄給你啊。
4樓：
首先是測定引物的od值，然而將引物溶解，最後合成引物。目前，引物合成最重用的方法是固相亞磷醯胺三酯法，引物它具有高效、快速的偶聯以及起始反應物比較穩定的特點。
5樓：
引物合成是通過測定引物的od值，溶解引物，最終合成引物的一個完善的過程。版目前引物合成基
權本採用固相亞磷醯胺三酯法。金開瑞生物提示你，亞磷醯胺三酯法合成dn**段，具有高效、快速的偶聯以及起始反應物比較穩定的特點。
亞磷醯胺三酯法是將dna固定在固相載體上完成dna鏈的合成的，合成的方向是由待合成引物的3′端向5′端合成的，相鄰的核苷酸通過3′→5′磷酸二酯鍵連線。
6樓：秒懂**
引物：一種具有特定核苷酸序列的大分子
pcr技術是如何合成引物的？
7樓：關中落葉
引物你自己設計，然後發給生物公司，過幾天就合成好了。現在沒有人自己合成引物了，很麻煩，而且要求也高。
別看那些ctrl+c的人的回答了，我都服了這些人了。你回答的這麼“專業”，你合成一個給我看看。當然，如果你是在生物公司專門合成引物的就當我沒說。
pcr引物是什麼？
8樓：點點星光帶晨風
聚合酶鏈式反應簡稱pcr（polymerase chain reaction） (又稱：多聚酶鏈式反應) pcr是體外酶促合成特異dn**段的一種方法，由高溫變性、低溫退火（復性）及適溫延伸等反應組成一個週期，迴圈進行，使目的dna得以迅速擴增,具有特異性強、靈敏度高、操作簡便、省時等特點。
它不僅可用於基因分離、克隆和核酸序列分析等基礎研究,還可用於疾病的診斷或任何有dna，rna的地方。pcr又稱無細胞分子克隆或特異性dna序列體外引物定向酶促擴增技術。
9樓：暴走少女
pcr引物又稱為寡核苷酸引物，也就是rna，是由人工合成的，分為兩種，引物1和引物2。由於dna聚合酶只能從核苷酸鏈的5'端到3'端進行復制，也就是隻能識別3'的尾端。
而且只能把核苷酸連到已經和dna模板互補產生的多核苷酸鏈上，所以引物1和2分別於雙鏈dna的兩條鏈的尾部（就是末尾是3'端的那一邊）結合，為那些脫氧核苷酸提供3'的末端，就相當於開了個頭。然後在dna聚合酶的作用下合成兩條新鏈。而那段引物就成了新鏈的一部分。
10樓：白色的妖精
通俗的講，引物就是為了增幅目的dna而匯入的短小dn**斷，在pcr反應中，新合成的dna是要接在引物上才能繼續按照模版dna複製。引物的設計因需要增幅的序列而不同。舉個例子來說，你要增幅如下序列：
accctcccgccccccccgtat
(互補鹼基不寫了）
那麼一般來說，你就要匯入以accctc結尾的引物使得增幅繼續下去，具體方法和注意事項樓主可以看gee_an大俠的資料。
查了一下測序公司的網頁，如果要同定微生物，樓主需要準備如下東東：
1、待測菌體。試管或培養皿都可以，但必須是純粹的待測菌體，不能含有其他的微生物。
2、提純的dna。如果1有致病性或傳染性，那麼樓主就得自己提純dna再交給測序公司。dna純度要求可以做pcr。
ps:很佩服樓主充足的經費，我們這裡同定一次要2800人民幣……
11樓：匿名使用者
pcr的目的是大量擴增你所需要的片斷。換句話說，就是用人工的方法大量複製dna。而dna的複製是以一條鏈為模板，新合成鏈按照鹼基互補配對進行的。
可是有一個問題，dna的合成必須是前端有一小段序列，他接著這段序列合成，而不能從無到有，憑空合成。它前面這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是dna也可以是rna，一般20多bp.
需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物
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