1樓：禾鳥
1、新增額外的鹼基序列，即保護鹼基，用來提高將來酶切時的活性。新增保護鹼基，需要考慮兩個因素：一是鹼基數目，一是鹼基種類。不同內切酶對識別位點以外最少保護鹼基數目的要求。
2、相鄰的兩個酶切位點不同時使用。在分子轉殖實驗中選擇載體的酶切位點時，相鄰的兩個酶切位點往往不能同時使用，因為乙個位點切割後留下的鹼基過少以至於影響旁邊的酶切位點切割。
擴充套件資料保護鹼基新增原則：
新增保護鹼基，需要考慮兩個因素：一是鹼基數目，一是鹼基種類。
新增保護鹼基時，最關心的應該是保護鹼基的數目，而不是種類。
新增保護鹼基，如果嚴格點，是根據兩條引物的tm值和各引物的鹼基分布及gc含量。如果某條引物tm值偏小，gc%較低，新增時多加g或c，反之亦反。
2樓：農友柳
dna合成，新鏈的延伸方向是5→3
因此，需要在5端加上酶切位點記得再加上一些保護鹼基，因為內切酶除了有特異的識別位點之外，
還需多幾個無需特異性的鹼基提供乙個platform讓它可以結合上去，否則會掉下來
保護鹼基的具體數目一般5-6個。
引物的結構就應該是（5→3）：保護鹼基+酶切位點+原來的引物序列
pcr引物前面如何加酶切位點
3樓：匿名使用者
設計好的引物序列5『端加上酶切位點的序列，一般還要在酶切位點的外面再加上2個a，這樣切起來效率高一些
4樓：
直接加在5『前面就可以啦 序列一起發給公司合成
pcr時 引物的5『端 有時需要加酶切位點 請問是怎麼加上去的 ???
5樓：火靈見賢
設計引物的時候認為加上的，注意選用的酶不要把載體和目的基因切了就成，保護鹼基用來使酶附著，還要在酶切位點和atg間加入不使起始密碼子移位的鹼基就好了
6樓：
dna合成，新鏈的延伸方向是5→3
因此，需要在5端加上酶切位點
酶切位點可以上網查
同時，記得再加上一些保護鹼基
因為內切酶除了有特異的識別位點之外，還需多幾個無需特異性的鹼基提供乙個platform讓它可以結合上去，否則會掉下來
保護鹼基的具體數目可以上neb的**查
那麼，引物的結構就是（5→3）：保護鹼基+酶切位點+原來的引物序列
如何在引物兩端加入酶切位點
7樓：匿名使用者
設計引物時在2引物的5『端新增酶切位點和保護鹼基，保護鹼基根據限制性內切酶的不同而不同，可查資料選擇。
8樓：士誠小人也
合成引物的時候直接新增上即可，注意末端加保護鹼基
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