1樓：來自木蘭山機智靈巧的柳杉
10%-15%（常見為10%）的dmso或甘油，含10%-20%血清的凍存培養液。
一般來講血清含量可以在10%-90%之間調整，凍存液中加入血清一方面可以為細胞提供營養，另一方面可以在細胞凍存過程中提供非滲透性保護物質，如蔗糖，白蛋白等從而更好地保護細胞。
有人親測10%血清凍存細胞，結果證明是可以的，但高血清比例的凍存液更有助於提高細胞活力，此外嬌貴的細胞可以適當提高凍存液中血清的比例以保證獲得更高的存活率及活力。
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細胞凍存和復甦的原則：
慢凍速融，這樣更加有利於保持細胞的活力。凍存細胞不加任何保護劑，會導致細胞內冰晶的產生，從而使細胞產生內源性的機械損傷，引起細胞內環境滲透壓，ph，電解質等的改變，進而促使細胞死亡。
常用的凍存保護劑為二甲基亞碸（dmso）和甘油，凍存細胞時加入保護劑，一方面可以提高細胞膜對水的通透性，另一方面使冰點降低，延緩凍結過程。
緩慢凍存細胞的過程中，加入保護劑可以使細胞內水分滲出到細胞外，一定程度上減少胞內冰晶的產生，而在快速復甦細胞的過程中，能使胞外冰晶迅速融化，防止水分滲入胞內再次形成冰晶而損傷細胞。
2樓：常山趙子龍
細胞凍存液製作步驟：
1、配製含10%dmso或甘油、10～20%小牛血清的凍存培養液。
2、取對數生長期的細胞，去除舊培養液，用pbs清洗。
3、去除pbs，加入適量胰蛋白酶（覆蓋培養皿表面）把單層生長的細胞消化下來。
4、離心1000rpm，5min。去除胰蛋白酶，加入適量配製好的凍存培養液。
5、用吸管輕輕吹打使細胞均勻，計數，調節凍存液中細胞的最終密度為5×106/ml～1×107/ml。
6、將細胞分裝入凍存管中，每管1～1.5 ml。
7、在凍存管上標明細胞的名稱，凍存時間及操作者。
8、凍存：標準的凍存程式為降溫速率-1～-2℃/ min；當溫度達-25℃以下時，可增至-5℃到 -10℃/min；到-100℃時，則可迅速浸入液氮中。
3樓：qq的勾k先生
細胞凍存液的配置成分及比例：
細胞凍存液是含10%dmso或甘油、10～20%小牛血清的凍存培養液。在凍存前一天最好換一次培養液。
配置方法：
1、將dmso和小牛血清加入培養液中，各自含量佔總體積的10%；
2、然後用濾膜過濾配置好的細胞凍存液；
3、用專用儲存瓶分裝儲存備用即可。
4樓：景德鎮市唐龍陶瓷****
細胞凍存
1.預先配製凍存液：10 % dmso + 90%胎牛血清,4℃冰箱儲存預冷；
2.用胰酶對細胞進行消化：倒去培養瓶中的培養基或用槍小心吸去培養板中的培養基,pbs沖洗兩次,用胰酶消化細胞（盡可能溫和）；
3.再次用完全培養液懸浮細胞,將預冷的凍存液加入消化完全的細胞中,用滴管輕輕吹打混勻.
4.在每支凍存管中加入1ml細胞液,密封後標記凍存細胞名稱和凍存日期.
5.凍存步驟的細緻直接關係到細胞復甦時的活力,如果有程式降溫器（放在-80℃冰箱過夜,放入液氮罐）最好；或者可以在4℃,2h；然後轉到-20℃,2h；-80℃,2h；放入液氮罐.
這是我實驗中用的protocol,
5樓：雲心月性冬日暖陽
自配凍存液，如下兩種配比：
a： 血清：dmso=9:1b： 培養基：血清：dmso=7:2:1
這兩種配比都是可以的。
之前實驗都是自己配的，但後來懶了，哈哈，就直接從裕恆豐買現成的，直接拿過來使用，省得再配了。
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