電泳實驗中什麼叫上樣緩衝液,電泳緩衝液濃度對實驗時間有影響嗎

時間 2021-09-04 19:21:04

1樓:匿名使用者

loading buffer 的中文名字叫上樣緩衝液,6kb的緩衝液中可以顯示兩條帶,前面的紫藍色的條帶是溴酚藍,在0.6%、1%、1.4%和2%瓊脂糖凝膠電泳中,溴酚蘭的遷移率分別與1kb、0.

6kb、0.2kb和0.15kb的雙鏈線性dn**段大致相同。

後面的藍色條帶是二甲苯氰,它在1%和1.4%瓊脂糖中電泳時,其遷移速率分別與2kb和1.6kb的雙鏈線性dna大致相似。而對於page膠他們的遷移速率也分別不同。

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ph計算

提到將等式同時取對數,並簡化就可以得到:

這就是henderson-hasselbalch方程。

值得注意的是,式子中酸及其共軛鹼的濃度都是平衡時的濃度,除了酸性過於強的情況下,由於同離子效應的存在,一般都可用此式計算,

根據此式可得出下列幾點結論:

1、緩衝液的ph值與該酸的電離平衡常數ka及鹽和酸的濃度有關。弱酸的pka值衡定,但酸和鹽的比例不同時,就會得到不同的ph值。酸和鹽濃度相等時,溶液的ph值與pka值相同。

2、酸和鹽濃度等比例增減時,溶液的ph值不變。

3、酸和鹽濃度相等時,緩衝液的緩衝效率為最高,比例相差越大,緩衝效率越低,緩衝液的一般有效緩衝範圍為ph=pka±1,poh=pkb±1。

配製方法

只要知道緩衝對的ph值,和要配製的緩衝液的ph值(及要求的緩衝液總濃度),就能按公式計算[鹽]和[酸]的量。這個演算法涉及對數換算,較麻煩,前人為減少後人的計算麻煩,已為我們總結出ph值與緩衝液對離子用量的關係並列出了**。

只要我們知道要配製的緩衝液的ph,經查表便可計算出所用緩衝劑的比例和用量。例如配製500nm ph5.8濃度為0.1m磷酸緩衝液。

經查表知ph5.8濃度為0.2m na2hpo48.

0毫升(1m=1 mol/l),而0.2m na2hpo492.0毫升。

依此可推論出配製100ml 0.1m的磷酸緩衝液需要0.1m na2hpo48.

0毫升,而0.1m na2hpo4需要92.0毫升。

計算好後,按計算結果準確稱好固態化學成分,放於燒杯中,加少量蒸餾水溶解,轉移入50ml容量瓶,加蒸餾水至刻度,搖勻,就能得到所需的緩衝液。

各種緩衝溶液的配製,均按**按比例混合,某些試劑,必須標定配成準確濃度才能進行,如醋酸、氫氧化鈉等。另外,所有緩衝溶劑的配製計量都能從以上的算式準確獲得。

2樓:

loading buffer的中文名字為上樣緩衝液,6×的緩衝液中可以顯示兩條帶,前面的紫藍色的條帶是溴酚藍,在0.6%、1%、1.4%和2%瓊脂糖凝膠電泳中,溴酚蘭的遷移率分別與1kb、0.

6kb、0.2kb和0.15kb的雙鏈線性dn**段大致相同。

loading buffer的功能主要有兩個:指示劑溴酚藍和二甲苯氰ff起到指示的作用,顯示電泳的程序,以便適時終止電泳;成分甘油可以加大樣品密度,使樣品密度大於tae,從而沉降到點樣孔中,防止樣品飄出點樣孔。

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非變性的page buffer就是0.5xtbe,上樣緩衝液可以用普通的loading buffer,含有tris,溴芬蘭以及甘油即可,甘油是主要的沉澱作用成分,都可以自己配。

細胞超聲即可,超聲後離心取上清。也有配native-page gel所用buffer為1×tbe,用的running buffer也是1×tbe。還有一點就是要在配gel時考慮能使蛋白多聚體穩定的因素。

3樓:我軒我炫

緩衝液在電泳過程中的一個作用是維持合適的ph。電泳時正極與負極都會發生電解反應,正極發生的是氧化反應(4oh--4e->2h2o+o2),負極發生的是還原反應(4h++4e->2h2),長時間的電泳將使正極變酸,負極變鹼。一個好的緩衝系統應有較強的緩衝能力,是溶液兩極的ph保持基本不變。

電泳緩衝液的另一個作用是使溶液具有一定的導電性,以利於dna分子的遷移,例如,一般電泳緩衝液中應含有0.01-0.04mol/l的na+離子,na+離子的濃度太低時電泳速度變慢;太高時就會造成過大的電流使膠發熱甚至熔化。

電泳緩衝液還有一個組分是edta,加入濃度為1-2mmol/l,目的是螯合mg2+ 等離子,防止電泳時啟用 dna酶,此外還可防止mg2+離子與核酸生成沉澱。

tae是使用最廣泛的緩衝系統。其特點是超螺旋在其中電泳時更符合實際相對分子質量(tbe中電泳時測出的相對分子質量會大於實際分子質量),且雙鏈線狀dna在其中的遷移率較其他兩種緩衝液快約10%,電泳大於13kb的片段時用tae緩衝液將取得更好的分離效果,此外,**dn**段時也易用tae緩衝系統進行電泳。tae的缺點是緩衝容量小,長時間電泳(如過夜)不可選用,除非有迴圈裝置使兩極的緩衝液得到交換。

tbe的特點是緩衝能力強,長時間電泳時可選用tbe,並且當用於電泳小於1kb的片段時分離效果更好。tbe用於瓊脂糖凝膠時易造成高電滲作用,並且因與瓊脂糖相互作用生成非共價結合的四羥基硼酸鹽複合物而使dn**段的**率降低,所以不宜在**電泳中使用。

tpe的緩衝能力也較強,但由於磷酸鹽易在乙醇沉澱過程中析出,所以也不宜在**dn**段的電泳中使用。

4樓:北京索萊寶科技****

蛋白上樣緩衝液

蛋白電泳上樣緩衝液包括2%sds , 0.1%溴酚藍 10%甘油,sds是保證樣品中的所有蛋白帶電荷一致,減少電荷對電泳結果的影響。還原劑是讓二硫鍵處於斷開狀態,保證蛋白分子的線性.

溴酚藍作用是指示上樣蛋白的跑膠時標記的,甘油是增加上樣重量的,以免漂浮,煮沸是使蛋白變性的永久儲存

電泳緩衝液濃度對實驗時間有影響嗎

5樓:北京索萊寶科技****

電泳緩衝液濃度對實copy驗時間有影響。(如下案例)

試驗在20-40mmol/l範圍內考察了醋酸銨濃度對4中組分分離度的影響。結果發信啊4中組分的遷移時間隨醋酸銨濃度的增大而延長,從而分離度得到改善。但是緩衝液濃度越大分析時間也越長,如圖3-3所示。

瓊脂糖凝膠電泳實驗中rna和dna的加樣緩衝液可以是一樣嗎

6樓:匿名使用者

不同dna有自己相應的條帶,比如基因組dna是一條,質粒一般是2條。而不同大小的dna有不同位置,越靠前的電泳速度快說明size小,和ladder比較就可以判斷自己dna大小。注意這些就可以

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