如何測定蛋白活性，蛋白藥物生物學活性檢測方法有哪些

1樓：匿名使用者

根據每個細胞有一定的重量而設計的。它可以用於單細胞、多細胞以及絲狀體微生物生長的測定。將一定體積的樣品通過離心或過濾將菌體分離出來，經洗滌，再離心後直接稱重，求出濕重，如果是絲狀體微生物，過濾後用濾紙吸去菌絲之間的自由水，再稱重求出濕重。

不論是細菌樣品還是絲狀菌樣品，可以將它們放在已知重量的平皿或燒杯內，於105℃烘乾至恒重，取出放入乾燥器內冷卻，再稱量，求出微生物乾重。

如果要測定固體培養基上生長的放線菌或絲狀真菌，可先加熱至50℃，使瓊脂熔化，過濾得菌絲體，再用50℃的生理鹽水洗滌菌絲，然後按上述方法求出菌絲體的濕重或乾重。

除了乾重、濕重反映細胞物質重量外，還可以通過測定細胞中蛋白質或dna的含量反映細胞物質的量。蛋白質是細胞的主要成分，含量也比較穩定，其中氮是蛋白質的重要組成元素。從一定體積的樣品中分離出細胞，洗滌後，按凱氏定氮法測出總氮量。

蛋白質含氮量為16％，細菌中蛋白質含量佔細菌固形物的50％一80％，一般以65％為代表，有些細菌則只佔13％一14％，這種變化是由菌齡和培養條件不同所產生的。因此總含氮量與蛋白質總量之間的關係可按下列公式計算：

蛋白質總量＝含氮量×6.25

核酸dna是微生物的重要遺傳物質，每個細菌的dna含量相當恆定，平均為8.4×`10^(-5)`ng。因此從一定體積的細菌懸液中所含的細菌中提取dna，求得dna含量，再計算出這一定體積的細菌懸液所含的細菌總數。

2樓：勇敢面對未來

借助專業機器，加技術

蛋白藥物生物學活性檢測方法有哪些

3樓：匿名使用者

一、mtt比色法檢測細胞活性

（一）原理

活細胞內線粒體琥珀酸脫氫酶能催化無色的mtt形成藍色的甲肷，其形成的量與活細胞數和功能狀態呈正相關。對細胞活力有影響的表達蛋白活性檢測可以通過mtt比色法進行。

（二）試劑準備

1、青鏈黴素溶液（100x）：青黴素100萬u，鏈黴素100萬u，溶於100mlddh2o中,抽濾除菌。

2、l15基礎培養基：1000mll15培養基，加2g碳酸氫鈉，10ml 100x青鏈黴素，5mlhepes。

3、mtt液：5mg/ml溶於l15基礎培養基。

4、sds處理液：20gsds，50μl二甲基甲醯胺，加雙蒸水50ml溶解。

5、l-多聚賴氨酸：50μg溶於1ml雙蒸水中。

6、l15基礎培養基溶解的不同濃度的蛋白液。

（三）操作步驟（以背根神經節細胞培養為例）

1、無菌條件下取新生一天的sd大鼠背根神經節（drg）。

2、鏡下去除神經根和外膜，放入1ml 0.1%膠原酶中37℃消化30min，每5min搖勻一次。

3、洗去膠原酶，吹打分散後，接種於預先塗有l-多聚賴氨酸的96孔培養板中，每孔含100μl無血清l15培養基，細胞約800個。

4、實驗組分別加入純化的表達蛋白（分別以不同的蛋白濃度），陰性對照加入等體積表達蛋白的溶劑。

5、37℃ 5%co2培養48hr後，每孔加入10μl mtt，37℃ 5%co2孵育4hr。

6、加入100μl 20%的sds處理液，37℃孵育20hr。

7、用el×800微孔酶標儀測定od570值，資料分析。

elisa測的是蛋白的活性還是含量

4樓：

當然是含量啦，有的elisa試劑盒吧自己叫做「體外活性」試劑盒，或者「結合活性」試劑盒，這兩種說法其實都不是蛋白的「生物活性」，只能是含量。除了酶，蛋白的活性一般都是用病毒、菌體、細胞或動物檢測的。

如何用elisa方法測定蛋白的結合常數

5樓：南京金益柏生物科技****

臨床elisa測定現通常為採用手工操作的以微孔板條為固相的測定模式，測定操作非常簡單，一般涉及到標本的收集儲存、試劑準備、加樣、溫育、洗板、顯色、比色、結果判斷和結果報告及解釋等方面，其中任一步驟的不當都會影響測定結果，且尤以加樣、溫育和洗板等步驟為甚。現分述如下。一.

臨床標本的收集和儲存