如何提取魚類DNA,魚類線粒體DNA怎樣提取

時間 2022-12-29 04:05:08

1樓:逛街老鼠人人豬

【步驟】一.提取脫氧核醣核蛋白。

1.殺鼠取肝3克(2—3只小鼠),15ml nacl, edta洗去血液。

2.肝勻漿製備。

(1)乳缽中剪碎。

(2)15ml nacl, edta

(3)不要用力研磨。

3.離心3000rpm 10分鐘,棄上清。

沉澱加入 nacl, edta 15ml輕輕懸起。

離心 3000rpm 10分鐘,棄上清。

沉澱加入 nacl, edta 10ml 使之溶解,轉至50毫公升三角燒瓶中。

二.除蛋白質。

1.加入30% sds 1ml 混勻,60℃水浴輕搖15分鐘,取出冷至室溫。

2. 5m nacl , 輕搖10分鐘。

3.氯仿-異丙醇19ml(沉澱蛋白),輕搖20分鐘,離心 2500rpm 10分。

三.粗提dna

1. 吸上清(水相)轉入玻璃離心管(含dna), 棄沉澱(剩餘物)

2. 加入倍體積冰乙醇(無水乙醇)輕搖至dna析出。

四. 檢測。

1.用鑷子或玻璃棒取出置試管中,加入 檸檬酸鈉1毫公升。

2.稀釋適當倍數:量取10-50μl (用刻度吸管吸取) 原液,用 m檸檬酸鈉稀釋到5ml(稀釋100-500倍)

3.測a260/a280(用 檸檬酸鈉做空白溶液)

五.計算。濃度:(μg/ml)=a260×50×稀釋倍數。

純度:a260/a280

【注意事項】

1. 研磨時上下用力,盡量避免dna鏈斷裂。

2.加入氯仿—異丙醇後勿劇烈搖動,以免大分子斷裂。

3.有機溶劑對人體有害,操作時要注意。

2樓:宇宙的設計師

為什麼不用魚白呢?更簡單。

魚類線粒體dna怎樣提取

3樓:匿名使用者

1全部基本上用第二代測序儀器乙個run即可完成。而且選擇測序的儀器也有區別要根據基因組的大小決定的。比如測乙個5m的基因組。

您如果自己購買儀器測序**自然又有不同了,大概需要15萬rmb(含稅**)

水煮法提取dna 的詳細過程

4樓:小傳七

水煮法提取dna

【試劑】緩衝液和溶液:用於篩選質粒的抗生素;氯黴素( 34mg/ml );選用:乙醇;異丙醇(ph8.

0)酶和緩衝液:溶菌酶( 10mg/ml );限制性內切核酸酶。

凝膠:瓊脂糖凝膠。

【實驗操作過程】

1、將500ml 培養物的細菌沉澱物重懸於用冰預冷的10mlstet【( nacl10mmol/l

tris·cl( edta(ph 中。將懸液移入50ml錐瓶中。

2、加入1ml新配製的溶菌酶溶液[10mg/ml,沉澱於10mmol/l

。如溶液的ph值低於溶菌酶不能有效地發揮作用。

3、用乙個夾子把錐瓶放在酒精燈的明火上加熱,直至液體恰好開始沸騰,不停地搖晃錐瓶。

4、立即把瓶浸入裝有沸水的大燒杯(2l)中,將瓶放在沸水中,時間恰為40s。

5、將瓶浸入用冰預冷的水中5min,使之冷卻。

6、將粘稠狀內容物從瓶中轉移到超離心管,於4℃以30

000rpm離心30min。原有的細菌物生長得越密,應越難將粘稠狀裂解物轉移到離心管中。必要時,可用長刀片和剪刀將裂解物剪成大小適於操作的大團塊,或抽入10ml注射器的針筒中使之部分剪下。

從用氯黴素處理的細菌培養物中分離質粒dna時,一般不會出現這樣的問題。如果細菌碎片沒能形成緊密的團塊,可以以35000rpm再度離心20min,然後盡可能將上清轉移到另一管內,棄去殘存在管內的粘稠狀液體。

7、將上清轉移到另一管內,純化質粒dna。

【原理】將細菌懸浮在含有能消化細胞壁的溶菌酶的緩衝液中,然後加熱到100℃使其裂解。加熱除了能破壞細菌外壁,還有助於解開dna鏈的鹼基配對,並使蛋白質和染色體dna變性。但是閉環質粒dna鏈彼此不會分離,這是因為它們的磷酸二酯骨架具有互相纏繞的拓撲結構。

當溫度下降後閉環dna的鹼基又各就各位,形成超螺旋分子。離心除去變性的染色體dna和蛋白質,就可以從上清中**質粒dna。

請教:小鼠尾巴dna提取方法

5樓:南京金益柏生物科技****

我之前做過,消化液自己配的,18ul消化液+2ul蛋白酶k。不過消化液的配方我忘了。

如何用蠟塊提取dna

開心水族箱的基因提取劑怎麼使用?(請玩過的人回答) 50

6樓:彩雲國友人帳

開心水族箱是樂元素旗下的手機遊戲。

開心水族箱的基因提取劑的使用方法:到魚基因格仔一欄,若原有的魚你裝扮過有特效,點格仔裡特效可以用提取劑提取下來,相當於和卸下來一樣,然後會回到包包裡。

不過這只是給魚兒加特效的,沒有其他作用,別抱其他期待。

7樓:冰霜凝葉

到魚基因格仔一欄,若原有的魚你裝扮過有特效,點格仔裡特效可以用提取劑提取下來。。和卸下來一樣。回到包包裡。

8樓:匿名使用者

通過融合,儲存配方開啟。

dna提取方法 5

9樓:匿名使用者

人體體細胞-稀鹽酸破壞細胞膜(內容物流出)然後離心。

怎樣找到魚的抗凍基因,並把它提出來呢?

10樓:玫瑰_薄荷

將魚放在低溫環境中生長一段時間,提取細胞總mrna,反轉錄成cdna,凝膠電泳分離。

將電泳結果與生長在正常環境中魚的細胞內mrna轉錄成的cdna凝膠電泳圖譜進行比較,找出抗凍魚特異性條帶。對該cdna進行測序,根據序列設計引物,進行pcr。

提取DNA過程中變黑褐色,提取的dna為什麼總是呈現褐色

的確有很多可能,多醣,次生代謝產物都有可能,它們和核酸的性質很像,很難去除。植物的核酸提取建議尋找特異的方法,有很多文獻有關於提取某種植物的方法,這裡無法提供更多意見 與你的離心機沒關係 植物材料中,特別是老的或是經逆境處理的材料,含有大量的酚類化合物,這些酚類化合物氧化後易與dna共價結合,使dn...

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愛如詩 天啊 書上有 看課文不就完了麼1.原理 利用dna在0.14mol l的nacl溶液中溶解度最低,而蛋白質等物質此時溶解度較高 同時dna不溶於酒精 以及dna遇二苯胺 沸水浴條件下 會呈藍色的特性。2.步驟 提取細胞核物質 溶解核內的dna 析出dna黏稠物 濾取含dna黏稠物 dna黏稠...

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