1樓:逛街老鼠人人豬
【步驟】一.提取脫氧核醣核蛋白。
1.殺鼠取肝3克(2—3只小鼠),15ml nacl, edta洗去血液。
2.肝勻漿製備。
(1)乳缽中剪碎。
(2)15ml nacl, edta
(3)不要用力研磨。
3.離心3000rpm 10分鐘,棄上清。
沉澱加入 nacl, edta 15ml輕輕懸起。
離心 3000rpm 10分鐘,棄上清。
沉澱加入 nacl, edta 10ml 使之溶解,轉至50毫公升三角燒瓶中。
二.除蛋白質。
1.加入30% sds 1ml 混勻,60℃水浴輕搖15分鐘,取出冷至室溫。
2. 5m nacl , 輕搖10分鐘。
3.氯仿-異丙醇19ml(沉澱蛋白),輕搖20分鐘,離心 2500rpm 10分。
三.粗提dna
1. 吸上清(水相)轉入玻璃離心管(含dna), 棄沉澱(剩餘物)
2. 加入倍體積冰乙醇(無水乙醇)輕搖至dna析出。
四. 檢測。
1.用鑷子或玻璃棒取出置試管中,加入 檸檬酸鈉1毫公升。
2.稀釋適當倍數:量取10-50μl (用刻度吸管吸取) 原液,用 m檸檬酸鈉稀釋到5ml(稀釋100-500倍)
3.測a260/a280(用 檸檬酸鈉做空白溶液)
五.計算。濃度:(μg/ml)=a260×50×稀釋倍數。
純度:a260/a280
【注意事項】
1. 研磨時上下用力,盡量避免dna鏈斷裂。
2.加入氯仿—異丙醇後勿劇烈搖動,以免大分子斷裂。
3.有機溶劑對人體有害,操作時要注意。
2樓:宇宙的設計師
為什麼不用魚白呢?更簡單。
魚類線粒體dna怎樣提取
3樓:匿名使用者
1全部基本上用第二代測序儀器乙個run即可完成。而且選擇測序的儀器也有區別要根據基因組的大小決定的。比如測乙個5m的基因組。
您如果自己購買儀器測序**自然又有不同了,大概需要15萬rmb(含稅**)
水煮法提取dna 的詳細過程
4樓:小傳七
水煮法提取dna
【試劑】緩衝液和溶液:用於篩選質粒的抗生素;氯黴素( 34mg/ml );選用:乙醇;異丙醇(ph8.
0)酶和緩衝液:溶菌酶( 10mg/ml );限制性內切核酸酶。
凝膠:瓊脂糖凝膠。
【實驗操作過程】
1、將500ml 培養物的細菌沉澱物重懸於用冰預冷的10mlstet【( nacl10mmol/l
tris·cl( edta(ph 中。將懸液移入50ml錐瓶中。
2、加入1ml新配製的溶菌酶溶液[10mg/ml,沉澱於10mmol/l
。如溶液的ph值低於溶菌酶不能有效地發揮作用。
3、用乙個夾子把錐瓶放在酒精燈的明火上加熱,直至液體恰好開始沸騰,不停地搖晃錐瓶。
4、立即把瓶浸入裝有沸水的大燒杯(2l)中,將瓶放在沸水中,時間恰為40s。
5、將瓶浸入用冰預冷的水中5min,使之冷卻。
6、將粘稠狀內容物從瓶中轉移到超離心管,於4℃以30
000rpm離心30min。原有的細菌物生長得越密,應越難將粘稠狀裂解物轉移到離心管中。必要時,可用長刀片和剪刀將裂解物剪成大小適於操作的大團塊,或抽入10ml注射器的針筒中使之部分剪下。
從用氯黴素處理的細菌培養物中分離質粒dna時,一般不會出現這樣的問題。如果細菌碎片沒能形成緊密的團塊,可以以35000rpm再度離心20min,然後盡可能將上清轉移到另一管內,棄去殘存在管內的粘稠狀液體。
7、將上清轉移到另一管內,純化質粒dna。
【原理】將細菌懸浮在含有能消化細胞壁的溶菌酶的緩衝液中,然後加熱到100℃使其裂解。加熱除了能破壞細菌外壁,還有助於解開dna鏈的鹼基配對,並使蛋白質和染色體dna變性。但是閉環質粒dna鏈彼此不會分離,這是因為它們的磷酸二酯骨架具有互相纏繞的拓撲結構。
當溫度下降後閉環dna的鹼基又各就各位,形成超螺旋分子。離心除去變性的染色體dna和蛋白質,就可以從上清中**質粒dna。
請教:小鼠尾巴dna提取方法
5樓:南京金益柏生物科技****
我之前做過,消化液自己配的,18ul消化液+2ul蛋白酶k。不過消化液的配方我忘了。
如何用蠟塊提取dna
開心水族箱的基因提取劑怎麼使用?(請玩過的人回答) 50
6樓:彩雲國友人帳
開心水族箱是樂元素旗下的手機遊戲。
開心水族箱的基因提取劑的使用方法:到魚基因格仔一欄,若原有的魚你裝扮過有特效,點格仔裡特效可以用提取劑提取下來,相當於和卸下來一樣,然後會回到包包裡。
不過這只是給魚兒加特效的,沒有其他作用,別抱其他期待。
7樓:冰霜凝葉
到魚基因格仔一欄,若原有的魚你裝扮過有特效,點格仔裡特效可以用提取劑提取下來。。和卸下來一樣。回到包包裡。
8樓:匿名使用者
通過融合,儲存配方開啟。
dna提取方法 5
9樓:匿名使用者
人體體細胞-稀鹽酸破壞細胞膜(內容物流出)然後離心。
怎樣找到魚的抗凍基因,並把它提出來呢?
10樓:玫瑰_薄荷
將魚放在低溫環境中生長一段時間,提取細胞總mrna,反轉錄成cdna,凝膠電泳分離。
將電泳結果與生長在正常環境中魚的細胞內mrna轉錄成的cdna凝膠電泳圖譜進行比較,找出抗凍魚特異性條帶。對該cdna進行測序,根據序列設計引物,進行pcr。
提取DNA過程中變黑褐色,提取的dna為什麼總是呈現褐色
的確有很多可能,多醣,次生代謝產物都有可能,它們和核酸的性質很像,很難去除。植物的核酸提取建議尋找特異的方法,有很多文獻有關於提取某種植物的方法,這裡無法提供更多意見 與你的離心機沒關係 植物材料中,特別是老的或是經逆境處理的材料,含有大量的酚類化合物,這些酚類化合物氧化後易與dna共價結合,使dn...
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愛如詩 天啊 書上有 看課文不就完了麼1.原理 利用dna在0.14mol l的nacl溶液中溶解度最低,而蛋白質等物質此時溶解度較高 同時dna不溶於酒精 以及dna遇二苯胺 沸水浴條件下 會呈藍色的特性。2.步驟 提取細胞核物質 溶解核內的dna 析出dna黏稠物 濾取含dna黏稠物 dna黏稠...
魚類的祖先叫什麼魚,魚類的祖先叫什麼?
由原始魚到現代魚的進化 按說每一種動物都有 它的祖先。魚類的祖先是 文昌魚,從狹意的角度上可以這麼說。但是我們也可以饒有趣味地這麼說 動物的進化是從無脊椎動物到脊椎動物,而脊椎動物中的進化依次排列為文昌魚 魚類 兩棲類 爬行類 鳥類 哺乳類 人類。魚的起源很早,在世界上還沒有人類的時候,魚類就生活在...